ГОСТ 7702.2.3-93
Группа Н19
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
МЯСО ПТИЦЫ, СУБПРОДУКТЫ И ПОЛУФАБРИКАТЫ ПТИЧЬИ
Метод выявления сальмонелл
Poultry meat, edible offal, ready-to-cook products. Method for detection of Salmonellae
ОКСТУ 9209
Дата введения 1995-01-01
Предисловие
1 РАЗРАБОТАН Госстандартом России
ВНЕСЕН Техническим секретариатом Межгосударственного Совета по стандартизации, метрологии и сертификации
2 ПРИНЯТ Межгосударственным Советом по стандартизации, метрологии и сертификации 21 октября 1993 г.
За принятие проголосовали:
Наименование государства | Наименование национального органа |
Республика Беларусь | Госстандарт Республики Беларусь |
Кыргызская Республика | Кыргызстандарт |
Республика Молдова | Молдовастандарт |
Российская Федерация | Госстандарт России |
Республика Таджикистан | Таджикстандарт |
Туркменистан | Главгосслужба "Туркменстандартлары" |
3 Постановлением Комитета Российской Федерации по стандартизации, метрологии и сертификации от 02.06.94 N 160 межгосударственный стандарт ГОСТ 7702.2.3-93 введен в действие непосредственно в качестве государственного стандарта Российской Федерации с 01.01.95
4 ВЗАМЕН ГОСТ 7702.2-74 в части метода выявления сальмонелл
5 ПЕРЕИЗДАНИЕ
ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ
ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ
Обозначение НТД, на который дана ссылка | Номер пункта |
ГОСТ 7702.2.0-95/ГОСТ Р 50396.0-92 | 1; 2.1; 2.2.1; 2.2.2; 2.2.3; 2.2.4; 2.2.5; 2.2.6; 2.2.7; 2.3; 2.4 |
ГОСТ 28560-90 | 2.2.3 |
Настоящий стандарт распространяется на предназначенные для реализации и промышленной переработки:
мясо птицы в виде потрошеных, полупотрошеных и потрошеных с комплектом потрохов и шеей тушек, частей, полученных при их разделке, а также обваленное и измельченное;
субпродукты и полуфабрикаты птичьи.
Стандарт устанавливает метод выявления сальмонелл.
Метод основан на высеве определенного количества продукта или смывов с его поверхности на жидкие неселективные и селективные питательные среды с выделением чистых культур на диагностических средах с морфологическими и культуральными признаками сальмонелл; в проверке биохимических свойств выделенных культур; в проверке их серологических реакций.
1 Методы отбора проб и подготовка к исследованиям
1 Методы отбора проб и подготовка к исследованиям - по ГОСТ 7702.2.0/ГОСТ Р 50396.0
2 Проведение исследования
2.1 Для выращивания бактериальных культур навеску продукта не менее 25 г или смыва не менее 25 см
высевают в пептонно-буферную воду, приготовленную по ГОСТ 7702.2.0/ГОСТ Р 50396.0, 2.4.11 в соотношении 1:5. Посевы инкубируют при (37±1) °С в течение 16-24 ч. Затем 10 см культуры из пептонно-буферной воды пересевают в 90 см одной из сред обогащения (Мюллера, Кауфмана, селенитовую, селенит-цистиновую, магниевую) по ГОСТ 7702.2.0/ГОСТ Р 50396.0, 2.4.12-2.4.16. Посевы инкубируют при (37±1) °С в течение 24-48 ч.
Через 24 и 48 ч со второй среды обогащения пересевают на две любые дифференциальные среды - Эндо, Левина, висмут-сульфитный агар и другие - по выбору см. (ГОСТ 7702.2.0/ГОСТ Р 50396.0, 2.4.10; 2.4.17; 2.4.18). Посевы на всех средах, кроме висмут-сульфитного агара инкубируют в течение 18-24 ч, а на висмут-сульфитном агаре при отсутствии роста подозрительных колоний инкубируют (48±1) ч при (37±1) °С.
Сальмонеллы на средах Эндо и Плоскирева растут в виде бесцветных колоний, на среде Левина - голубоватых, на висмут-сульфитном агаре - обычно в виде черных колоний с металлическим блеском с окраской среды под колониями в черный цвет. S. typhi и некоторые другие на висмут-сульфитном агаре растут в виде бесцветных или светло-зеленых колоний без окраски среды под колониями. На агаре с бриллиантовым зеленым и феноловым красным типичные сальмонеллы имеют розовую окраску.
При отсутствии подозрительных колоний на дифференциальных средах работу с посевами прекращают. Подозрительные колонии используют в дальнейших исследованиях.
2.2 Биохимические свойства культуры определяют путем исследования не менее пяти подозрительных колоний, выросших на дифференциальной среде. Определяют расщепление сахаров, мочевины, образование индола, сероводорода, ацетил-метил-карбинола (реакция Фогес-Проскауэра), утилизацию цитрата, расщепление аминокислот.
2.2.1 Для выявления расщепления сахаров используют либо среды Гисса по ГОСТ 7702.2.0/ГОСТ Р 50396.0, 2.4.19, либо одну из комбинированных сред (Клиглера, Ресселя, агар тройной сахарный по ГОСТ 7702.2.0/ГОСТ Р 50396.0, 2.4.20-2.4.22).
Для посевов в среды Гисса часть каждой из пяти отобранных подозрительных колоний снимают бактериологической петлей, размешивают в 0,5-1 см стерильного физиологического раствора. Полученную взвесь засевают в среды Гисса, инкубируют при (37±1) °С в течение 12-18 ч, после чего посевы просматривают. При образовании кислоты меняется цвет среды.
Посев на одну из комбинированных сред проводят штрихом на скошенную часть и уколом в столбик. Посевы инкубируют при (37±1) °С, учет проводят через (24±1) ч.
При ферментации лактозы, сахарозы в скошенной части столбика комбинированных сред происходит пожелтение. Покраснение или пожелтение самого столбика указывает на расщепление глюкозы.
Сальмонеллы не разлагают лактозу и сахарозу, расщепляют глюкозу с образованием кислоты и газа, а маннит - с образованием кислоты.
2.2.2 Для выявления расщепления мочевины используют одну из сред: агар тройной сахарный или скошенный агар с мочевиной по ГОСТ 7702.2.0/ГОСТ Р 50396.0, 2.4.24.
Восстановление изменившегося цвета среды агара тройного сахарного при расщеплении глюкозы (см. 2.2.1) с красного или желтого цвета до бледно-розового свидетельствует о расщеплении мочевины.
Посевы на поверхность скошенного агара с мочевиной инкубируют при температуре (37±1) °С в течение (24±1) ч. Окрашивание среды в красный цвет происходит при расщеплении мочевины. Отсутствие изменения окраски - отрицательная реакция.
Сальмонеллы мочевину не расщепляют.
2.2.3 Для выявления образования индола проводят посев в одну из питательных сред: 1%-ную пептонную воду по ГОСТ 7702.2.0/ГОСТ Р 50396.0, 2.3.2 или в триптон-триптофановую среду по ГОСТ 28560. Посевы инкубируют при (37±1) °С в течение (24±1) ч.
В пробирки с суточной культурой в пептонной воде по стенке добавляют 5-10 капель одного из реактивов: Эрлиха или Ковача по ГОСТ 28560. В первом случае при наличии индола не позднее чем через 5 мин в пограничном слое образуется ярко-красное кольцо, при отсутствии - кольцо остается светло-желтого цвета. Во втором случае после взбалтывания результаты учитывают через 10 мин: реактив поднимается на поверхность среды и при наличии индола окрашивается в темно-красный цвет.
В пробирку с суточной культурой в триптон-триптофановой среде добавляют 1 см реактива Эрлиха или Ковача. Темно-красное кольцо - реакция положительная; коричнево-желтое кольцо - реакция отрицательная.
Сальмонеллы индола не образуют.
2.2.4 Для выявления образования сероводорода используют одну из питательных сред: агар тройной сахарный, или среду Клиглера, или 1%-ную пептонную воду. Посевы инкубируют при (37±1) °С в течение 24-72 ч.
При посеве культуры в одну из комбинированных сред об образовании сероводорода судят по почернению среды в столбике.
При посеве культуры в 1%-ную пептонную воду в пробирку под пробку помещают полоску фильтровальной бумаги, предварительно смоченную уксуснокислым свинцом и высушенную по ГОСТ 7702.2.0/ГОСТ Р 50396.0, 2.3.21. Полоска не должна соприкасаться с питательной средой. При выделении культурой сероводорода через 24-72 ч инкубирования бумажка с уксуснокислым свинцом чернеет.
Сальмонеллы выделяют сероводород.
2.2.5 Для выявления утилизации цитрата культуру высевают на скошенный столбик агара Симмонса по ГОСТ 7702.2.0/ГОСТ Р 50396.0, 2.4.23, инкубируют при (37±1) °С в течение (24±1) ч. Окрашивание среды в синий цвет - положительная реакция, отсутствие изменений - отрицательная реакция.
Сальмонеллы, за небольшим исключением, дают положительную реакцию.
2.2.6 Для выявления способности культуры к образованию ацетил-метил-карбинола (реакция Фогес-Проскауэра) засевают ее в среду по ГОСТ 7702.2.0/ГОСТ Р 50396.0, 2.4.25. Посевы инкубируют при (37±1) °С в течение (24±3) ч, после чего переносят 1 см посева в пустую пробирку, добавляют 0,2 см раствора гидроокиси калия по ГОСТ 7702.2.0/ГОСТ Р 50396.0, 2.3.19 и 0,6 см раствора 
-нафтола по ГОСТ 7702.2.0/ГОСТ Р 50396.0, 2.3.18 и несколько кристаллов креатина. Пробирки тщательно встряхивают и оставляют на 1 ч при комнатной температуре. При наличии ацетил-метил-карбинола среда окрашивается в розовый цвет. При отрицательной реакции остаток среды инкубируют еще 24 ч и тест повторяют.
Сальмонеллы имеют отрицательную реакцию Фогес-Проскауэра.
2.2.7 Для определения расщепления аминокислот культуру высевают методом укола в пробирку со столбиком агаризованной среды с одной из аминокислот по ГОСТ 7702.2.0/ГОСТ Р 50396.0, 2.4.27, 2.4.28, инкубируют при температуре (37±1) °С в течение (24±3) ч.
При декарбоксилировании лизина появляется темно-красная окраска. При отрицательной реакции окраска желтая. Сальмонеллы декарбоксилируют лизин.
Для теста расщепления фенилаланина культуру высевают на поверхность скошенного агара, инкубируют при температуре (37±1) °С в течение (24±1) ч, затем на поверхность среды наносят 3-4 капли хлорного железа. Появление зеленой окраски среды - положительная реакция, цвет среды не изменяется - отрицательная реакция. Сальмонеллы дают отрицательную реакцию.
2.3 Для выявления подвижности культуру высевают методом укола в пробирку со столбиком полужидкого агара по ГОСТ 7702.2.0/ГОСТ Р 50396.0, 2.4.29. Посевы инкубируют при температуре (37±1) °С в течение (24±1) ч.
О наличии подвижности свидетельствуют диффузный рост вокруг линии укола и помутнение столбика агара.
2.4 Серологические реакции проводят с суточной культурой, выросшей на агаризованной среде по ГОСТ 7702.2.0/ГОСТ Р 50396.0, 2.4.1; 2.4.4.
Определяют чистые колонии на способность самоагглютинации и на присутствие О, Vi, H - антигенов сальмонелл.
При этом на предметное стекло помещают каплю физиологического раствора, а рядом каплю одной из антисальмонеллезных сывороток (поливалентную О-сыворотку, отдельных О-групп и другие).
Растирают в капле некоторое количество исследуемой культуры до получения однородной мутной суспензии. Покачивают стекло в течение 30-40 с, затем помещают его на темный фон и рассматривают. При агглютинации образуются хлопья, комочки.
Штампы считаются самоагглютинирующими при образовании хлопьев, комочков в капле физиологического раствора, и они серологическому подтверждению не подлежат.
При получении положительной реакции с поливалентной О-сывороткой культуру испытывают с сыворотками к антигенам отдельных О-групп, входящими в поливалентные сыворотки.
Для выявления Vi-антигена исследуемую культуру испытывают с моновалентной Vi-сывороткой; Н-антигенов - с моновалентными Н-сыворотками.
Для выявления Н-антигена в реакции агглютинации следует использовать культуру с нижней, более влажной части скошенного агара, в которой лучше развит Н-антиген.
Положительная реакция - агглютинация бактерий, отрицательная реакция - отсутствие агглютинации. Сальмонеллы дают положительную реакцию.
На основании серологических исследований подтверждают или исключают принадлежность выделенной культуры к роду сальмонелл.
3 Обработка результатов
3.1 Результаты исследований оценивают по каждой пробе в отдельности.
3.2 К бактериям рода сальмонелл относят те культуры, которые дали типичные биохимические и серологические реакции.
3.3 Результаты исследований записывают следующим образом: сальмонеллы обнаружены или не обнаружены в 25 г продукта или в смыве с продукта с указанием исследуемой площади в квадратных сантиметрах.