ГОСТ 28805-90
Группа Н09
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ
Методы выявления и определения количества осмотолерантных дрожжей и плесневых грибов
Food products. Methods for detection and determination of osmotolerantic yeast and mould quantity
МКС 07.100.30
ОКСТУ 9109
Дата введения 1993-01-01
ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ
1. РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Всесоюзным научно-исследовательским институтом консервной и овощесушильной промышленности (ВНИИКОП), Сибирским филиалом Всесоюзного научно-исследовательского и конструкторского института молочной промышленности, Техническим комитетом по стандартизации ТК 93 "Продукты переработки плодов и овощей"
2. УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по управлению качеством продукции и стандартам от 21.12.90 N 3230
3. ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
4. ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ
Обозначение НТД, на который дана ссылка | Номер раздела, пункта |
ГОСТ 22-94 | Разд.2 |
ГОСТ 6672-75 | Разд.2 |
ГОСТ 9225-84 | Разд.1 |
ГОСТ 9284-75 | Разд.2 |
ГОСТ 10444.1-84 | Разд.2, 3.3.1 |
ГОСТ 10444.12-88 | 3.1.2, 3.3.2, 4.8, 5.2 |
ГОСТ 24104-88 | Разд.2 |
ГОСТ 26668-85 | Разд.1 |
ГОСТ 26669-85 | Разд.1, 4.1 |
ГОСТ 26670-91 | 4.3, 5.4 |
ГОСТ 30425-97 | 5.3 |
5. Ограничение срока действия снято по протоколу N 7-95 Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации (ИУС 11-95)
6. ПЕРЕИЗДАНИЕ. Апрель 2010 г.
Настоящий стандарт распространяется на пищевые продукты и устанавливает методы определения количества осмотолерантных дрожжей и плесневых грибов посевом пищевого продукта или его разведения в агаризованную среду, определения наиболее вероятного числа (НВЧ) и выявления присутствия (отсутствия) осмотолерантных дрожжей и плесневых грибов в определенной навеске продукта.
Методы основаны на высеве определенного количества продукта и (или) его разведений в селективную питательную среду, культивировании посевов в оптимальных условиях, подсчете количества или определении присутствия (отсутствия) осмотолерантных дрожжей и плесневых грибов.
Метод определения количества посевом в агаризованную среду предназначен для пищевых продуктов, содержащих в 1 г более 150 или в 1 см
более 15 осмотолерантных дрожжей и (или) содержащих в 1 г более 50 или в 1 см более 5 осмотолерантных плесневых грибов.
Метод НВЧ предназначен для пищевых продуктов, содержащих в 1 г менее 150, но в 10 г более 3 или в 1 см менее 15, но в 100 см более 3 осмотолерантных дрожжей и (или) содержащие в 1 г менее 50, но в 10 г более 3 или в 1 см менее 5, но в 100 см более 3 осмотолерантных плесневых грибов.
1. ОТБОР И ПОДГОТОВКА ПРОБ
1. ОТБОР И ПОДГОТОВКА ПРОБ
Отбор и подготовка проб пищевых продуктов - по ГОСТ 26668, ГОСТ 26669. Отбор и подготовка проб сгущенных молочных консервов с сахаром - по ГОСТ 9225*.
________________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 53430-2009.
2. АППАРАТУРА, МАТЕРИАЛЫ И РЕАКТИВЫ
Для проведения испытания применяют аппаратуру, материалы и реактивы по ГОСТ 10444.1 со следующими дополнениями:
весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104* с наибольшим пределом взвешивания до 200 г и пределом допускаемой погрешности ±2 мг (для взвешивания реактивов);
________________
* С 1 июля 2002 г. введен в действие ГОСТ 24104-2001. На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 53228-2008.
весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания до 1 кг и пределом допускаемой погрешности ±10 мг (для взвешивания продукта);
микроскоп световой биологический, обеспечивающий увеличение 90-900
;
стекла предметные по ГОСТ 9284;
стекла покровные по ГОСТ 6672;
термостат с диапазоном рабочих температур 28-55 °С, позволяющий поддерживать заданную температуру с погрешностью ±1 °С;
метиленовый синий;
сахар-рафинад по ГОСТ 22*.
________________
* На территории Российской Федерации с 1 июля 2011 г. будет действовать ГОСТ Р 53396-2009.
3. ПОДГОТОВКА К ИСПЫТАНИЮ
3.1. Приготовление растворов
3.1.1. Приготовление раствора метиленового синего концентрацией 10 г/дм: 1 г метиленового синего переносят в фарфоровую ступку и постепенно растворяют в дистиллированной воде. Раствор переносят в мерную колбу вместимостью 100 см и доливают до метки.
Раствор хранят в закрытом сосуде из темного стекла при комнатной температуре не более 3 мес.
3.1.2. Растворы антибиотиков готовят по ГОСТ 10444.12.
3.2. Приготовление питательных сред
3.2.1. Среда жидкая: 610,0 г сахара-рафинада, 20,0 г глюкозы и 25 см дрожжевого экстракта постепенно при нагревании на водяной бане добавляют к 345 см дистиллированной воды. После расплавления сахаров смесь охлаждают до (50±5) °С. Устанавливают рН среды таким образом, чтобы он составлял 5,8±0,1 (в пересчете на (25±1) °С). Питательную среду разливают в колбы и (или) пробирки и стерилизуют текучим паром в течение 30 мин.
3.2.2. Среда агаризованная: 15,0 г агара добавляют к 345 см дистиллированной воды и оставляют на 30 мин для набухания агара.
Затем расплавляют при нагревании и добавляют 20,0 г глюкозы, 25 см дрожжевого экстракта. В полученной смеси при нагревании на водяной бане постепенно растворяют 610,0 г сахара-рафинада.
После расплавления сахара смесь охлаждают до (50±5) °С.
Устанавливают рН среды таким образом, чтобы он составлял 5,8±0,1 (в пересчете на (25±1) °С). Питательную среду разливают в колбы и стерилизируют текучим паром в течение 30 мин.
3.3. Приготовление питательных сред, применяемых для испытания сгущенных молочных консервов с сахаром
3.3.1. Солодовое агаризованное сусло с сахарозой
Приготовление сусла с сахарозой: к 500 см солодового сусла, приготовленного по ГОСТ 10444.1, добавляют 420,0 г сахара-рафинада, нагревая перемешивают до полного его растворения, фильтруют, охлаждают до (50±5) °С. Устанавливают с помощью молочной кислоты рН таким образом, чтобы он составлял 3,6±0,1 (в пересчете на (25±1) °С). Сусло с сахарозой разливают по 60 см в колбы и стерилизуют текучим паром в течение 30 мин.
Приготовление агаризованного сусла: к 500 см солодового сусла с рН 3,6±0,1 добавляют 30,0 г агара, нагревают, при перемешивании расплавляют агар. Среду фильтруют и разливают по 40 см в колбы, затем стерилизуют текучим паром в течение 30 мин.
Непосредственно перед посевом агаризованное сусло расплавляют на водяной бане, а сусло с сахарозой нагревают до температуры (50±5) °С и две эти части смешивают.
3.3.2. Питательные среды с антибиотиками и сахарозой: к 1 дм дистиллированной воды добавляют 20,0 г агара и оставляют на 30 мин для набухания агара, затем добавляют 10,0 г пептона и, постоянно перемешивая, нагревают до полного расплавления агара, добавляют 40,0 г мальтозы или глюкозы и 450,0 г сахара-рафинада, перемешивают до полного растворения составных частей, при наличии осадка фильтруют. Устанавливают с помощью молочной кислоты рН таким образом, чтобы он составлял 6,5±0,1 (в пересчете на (25±1) °С).
Питательную среду разливают по 100 см в колбы и стерилизуют текучим паром в течение 30 мин.
Непосредственно перед использованием к среде добавляют в соответствии с ГОСТ 10444.12 растворы антибиотиков.
4. ПРОВЕДЕНИЕ ИСПЫТАНИЯ
4.1. Из навески продукта готовят исходное и ряд десятикратных разведений по ГОСТ 26669 так, чтобы можно было определить в 1 г (см) предполагаемое количество осмотолерантных дрожжей и плесневых грибов или количество, указанное в нормативно-технической документации на конкретный продукт.
4.2. При определении количества осмотолерантных дрожжей и плесневых грибов по методу НВЧ высевают в трехкратной повторности три последовательных навески продукта и (или) разведения продукта, отличающиеся по количеству продукта в 10 раз. Каждую навеску продукта и (или) разведение продукта высевают в колбу или пробирку с питательной средой, приготовленной по п.3.2.1.
Соотношение количества высеваемого продукта или его разведения и питательной среды 1:9.
4.3. При определении количества осмотолерантных дрожжей и плесневых грибов методом посева в агаризованные среды по 1 см навески продукта или его разведения вносят одновременно в две чашки Петри. Посевы заливают по ГОСТ 26670 агаризованной питательной средой, приготовленной по п.3.2.2.
4.4. При определении присутствия (отсутствия) осмотолерантных дрожжей и плесневых грибов в определенной навеске продукта или его эквивалентном разведении, эту навеску или разведение вносят в жидкую питательную среду по п.3.2.1 (в соотношении 1:9) или высевают по п.4.3 в агаризованную среду.
При испытании сгущенных молочных консервов с сахаром навеску продукта массой (10,0±0,1) г тщательно перемешивают со 100 см охлажденной до (45±2) °С агаризованной питательной средой по п.3.3.1 или п.3.3.2. Смесь разливают в 6-7 чашек Петри.
4.5. Посевы инкубируют в течение 7 сут при температуре (30±1) °С.
4.6. Через 3 сут проводят предварительную оценку результатов инкубирования посевов, а через 7 сут - окончательную.
Колонии осмотолерантных дрожжей и плесневых грибов разделяют визуально.
Рост осмотолерантных дрожжей на агаризованных питательных средах сопровождается образованием выпуклых, блестящих, серовато-белых колоний с гладкой поверхностью и ровным краем. Рост осмотолерантных дрожжей на жидких питательных средах сопровождается появлением мути, запаха брожения и газа.
Рост осмотолерантных плесневых грибов на питательных средах сопровождается появлением мицелия различной окраски.
4.7. Для подсчета количества отбирают чашки, на которых выросло от 15 до 150 колоний дрожжей и (или) от 5 до 50 колоний плесневых грибов.
4.8. При необходимости для разделения дрожжей и плесневых грибов проводят микроскопические исследования. Для этого из культуральной жидкости или отдельных колоний готовят мазки и окрашивают их раствором метиленового синего. На подсушенный мазок наносят раствор метиленового синего, приготовленного по п.3.1.1, выдерживают 5 мин, сливают краску, высушивают на воздухе и микроскопируют для определения дрожжевых клеток или гифов плесневых грибов.
Допускается проводить микробиологические исследования по ГОСТ 10444.12.
4.9. Колбы (пробирки), в которых обнаружен рост осмотолерантных дрожжей и (или) плесневых грибов, считают положительными.
5. ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ
5.1. Результаты испытания оценивают на каждой пробе отдельно.
5.2. Пересчет количества осмотолерантных дрожжей и плесневых грибов на 1 г (см) продукта проводят по ГОСТ 10444.12.
5.3. Наиболее вероятное число (НВЧ) осмотолерантных дрожжей и плесневых грибов в 1 г (см) продукта определяют по количеству положительных колб (пробирок), пользуясь таблицей, приведенной в ГОСТ 30425.
5.4. Результаты определения количества осмотолерантных дрожжей и плесневых грибов записывают по ГОСТ 26670.
5.5. Результаты выявления присутствия (отсутствия) осмотолерантных дрожжей и плесневых грибов с указанием навески продукта записывают следующим образом:
осмотолерантные дрожжи и (или) плесневые грибы обнаружены или не обнаружены.