ГОСТ Р 51469-99
Группа Н19
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
КАЗЕИНЫ И КАЗЕИНАТЫ
Фотометрический метод определения массовой доли лактозы
Caseins and caseinates.
Photometric method for determination of lactose content
ОКС 67.100.10
ОКСТУ 9209
Дата введения 2001-01-01
Предисловие
1 РАЗРАБОТАН Государственным учреждением Всероссийским научно-исследовательским институтом молочной промышленности (ГУ ВНИМИ)
ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 186 "Молоко и молочные продукты"
2 ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 22 декабря 1999 года N 624-ст
3 Настоящий стандарт гармонизирован с международным стандартом ИСО 5548-80* "Казеины и казеинаты. Определение содержания лактозы. Фотометрический метод"
________________
* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым здесь и далее по тексту, можно получить, перейдя по ссылке на сайт http://shop.cntd.ru. - Примечание изготовителя базы данных.
4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
5 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Апрель 2011 г.
1 Область применения
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на казеины и казеинаты массовой долей углеводов не более 2%. Стандарт устанавливает фотометрический метод определения массовой доли лактозы и других растворимых углеводов.
Метод основан на растворении навески продукта в горячей воде или растворе, осаждении осадка фильтрации, окраске безбелкового осадка углеводов, фотометрического измерения и определения массовой доли лактозы в соответствии с калибровочным графиком.
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ 61-75 Кислота уксусная. Технические условия
ГОСТ 199-78 Натрий уксуснокислый 3-водный. Технические условия
ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
ГОСТ 3118-77 Кислота соляная. Технические условия
ГОСТ 4201-79 Натрий углекислый кислый. Технические условия
ГОСТ 4204-77 Кислота серная. Технические условия
ГОСТ 6859-72 Приборы для отмеривания и отбора жидкостей. Технические условия
ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия
ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия
ГОСТ 19814-74 Кислота уксусная синтетическая и регенерированная. Технические условия
ГОСТ 23519-93 Фенол синтетический технический. Технические условия
ГОСТ 24104-88* Весы лабораторные общего назначения и образцовые. Общие технические условия
__________________
* С 1 июля 2002 г. введен в действие ГОСТ 24104-2001. На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 53228-2008.
ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
ГОСТ 26809-86 Молоко и молочные продукты. Правила приемки, методы отбора и подготовки проб к анализу
ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1
ГОСТ 29251-91 (ИСО 385-1-84) Посуда лабораторная стеклянная. Бюретки. Часть 1. Общие требования
ИСО 707-97* Молоко и молочные продукты. Методы отбора проб
_______________
* Действует до введения в действие ГОСТ Р, разработанного на основе соответствующего ИСО. С 11 августа 2008 г. действует ИСО 707:2008.
3 Определение
В настоящем стандарте применяют следующий термин с соответствующим определением:
массовая доля лактозы в казеинах и казеинатах: Отношение массы растворимых углеводов к массе навески продукта, умноженное на 100.
4 Аппаратура, материалы и реактивы
Дозаторы серной кислоты по ГОСТ 6859 вместимостью 10 см
.
Весы лабораторные по ГОСТ 24104, 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г и ценой поверочного деления 0,001 г.
Устройство измельчающее, без нагрева пробы при измельчении и без потери или поглощения влаги.
Колбы конические по ГОСТ 25336 вместимостью 100 и 500 см.
Сито из проволочной сетки диаметром 200 мм, размером стороны ячейки 500 мкм.
Пробирки с притертыми пробками по ГОСТ 1770 вместимостью 40 см.
Пипетки по ГОСТ 29227 исполнения 2, 1-го и 2-го класса точности, вместимостью 1, 2 и 10 см.
Микропипетки вместимостью 0,2 см и ценой деления 0,001 см.
Баня водяная с возможностью установки температур (20±1) °С и от 60 °С до 70 °С.
Цилиндры мерные по ГОСТ 1770 2-го класса точности вместимостью 25 см.
Фотоэлектроколориметр диапазоном измерения при длине волны 490 нм, с кюветами размером оптического пути от 1 до 2 см.
Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Натрий углекислый кислый (NaHCO
) по ГОСТ 4201, ч.д.а.
Натрия трифосфат (Na
РО
) по технической документации, ч.д.а.
Кислота соляная по ГОСТ 3118, раствор концентрации 0,1 моль/дм, х.ч.
Кислота серная концентрированная по ГОСТ 4204, плотностью 1,84 г/см, раствор концентрации 1 моль/дм, х.ч.
Кислота уксусная по ГОСТ 61, раствор 100 г уксусной кислоты в 1 дм дистиллированной воды, х.ч.
Натрий уксуснокислый (CHCOONa) по ГОСТ 199, раствор концентрации 1 моль/дм, ч.д.а.
Фенол по ГОСТ 23519, раствор с массовой долей фенола 80%.
Лактоза безводная, ч.д.а.
Кислота уксусная синтетическая и регенерированная по ГОСТ 19814.
Допускается применять другие средства измерений с метрологическими характеристиками и оборудование с техническими характеристиками не хуже, а также реактивы по качеству не ниже указанных.
5 Отбор проб
Отбор и подготовка проб - по ГОСТ 26809, для экспортно-импортных операций - по ИСО 707.
6 Подготовка к определению
6.1 Подготовка пробы
6.1.1 В колбу вместимостью 250 см помещают (50±1) г казеина или казеината, закрывают колбу пробкой и перемешивают пробу десятикратным переворачиванием и встряхиванием колбы.
6.1.2 Тщательно перемешанную пробу переносят на лабораторное сито.
6.1.3 Если 50 г пробы полностью просеивается через сито, проба пригодна для дальнейшей работы.
6.1.4 Если проба полностью или частично не проходит, измельчают (50±5) г образца. Пробу просеивают и переносят в колбу вместимостью 250 см, закрывают пробкой и тщательно перемешивают не менее чем десятикратным переворачиванием колбы. Во время проведения этих работ необходимо исключить попадание влаги в продукт и дальнейшее определение проводить как можно скорее.
6.2 Приготовление растворов для построения калибровочного графика
6.2.1 Раствор лактозы
В мерную колбу вместимостью 100 см помещают (2,000±0,001) г безводной лактозы, доливают дистиллированной водой до метки и перемешивают до полного растворения. Раствор хранят при температуре 0 °С.
6.2.2 Приготовление градуированных растворов
6.2.2.1 Раствор А
В мерную колбу вместимостью 100 см пипеткой отмеряют 10 см раствора лактозы (по 6.2.1) и доливают дистиллированной водой до метки.
В 1 см раствора А содержится 2 мг безводной лактозы.
6.2.2.2 Раствор N 1
В мерную колбу вместимостью 100 см пипеткой отмеряют 1 см раствора А и доливают дистиллированной водой до метки.
В 1 см раствора содержится 20 мкг безводной лактозы.
6.2.2.3 Раствор N 2
В мерную колбу вместимостью 100 см пипеткой отмеряют 2 см раствора А, доливают дистиллированной водой до метки.
В 1 см раствора содержится 40 мкг безводной лактозы.
6.2.2.4 Раствор N 3
В мерную колбу вместимостью 100 см пипеткой отмеряют 3 см раствора А, доливают дистиллированной водой до метки.
В 1 см раствора содержится 60 мкг безводной лактозы.
6.2.2.5 Раствор сравнения
В колбу вместимостью 100 см вносят (0,100±0,001) г углекислого кислого натрия для кислотного казеина или (0,100±0,001) г трифосфата натрия - для сычужного казеина и доливают 25 см дистиллированной воды. Перемешивают встряхиванием и ставят на водяную баню при температуре (65±5) °С до полного растворения. Далее обработка раствора по 6.3.4.
6.3 Подготовка фильтрата в соответствии с требованиями, изложенными в приложении А
6.3.1 Навеску массой (1,00±0,01) г казеина или казеината по 6.1 помещают в коническую колбу вместимостью 100 см и добавляют (кроме казеината):
- для кислотного казеина - (0,100±0,001) г углекислого кислого натрия (NaHCO);
- для сычужного казеина - (0,100±0,001) г трифосфата натрия (NaHO).
6.3.2 В колбу доливают 25 см дистиллированной воды, ставят на водяную баню температурой от 60 до 70 °С. Колбу периодически перемешивают встряхиванием.
6.3.3 Нагревание проводят в течение 10-15 мин до полного растворения навески.
6.3.4 Колбу охлаждают до комнатной температуры и постепенно добавляют:
- 15 см дистиллированной воды и перемешивают встряхиванием;
- 8 см раствора соляной кислоты или раствора серной кислоты концентрации 0,1 моль/дм и перемешивают встряхиванием;
- 1 см раствора уксусной кислоты и перемешивают встряхиванием.
Колбу оставляют на 5 мин.
Затем добавляют 1 см раствора ацетата натрия и перемешивают встряхиванием.
Колбу оставляют до полного осаждения казеинового преципитата.
Раствор фильтруют через сухую фильтровальную бумагу.
7 Проведение определения
7.1 В пробирку вместимостью 40 см отмеряют пипеткой 2 см фильтрата, добавляют микропипеткой 0,2 см раствора фенола массовой долей 80% и перемешивают встряхиванием.
Доливают концентрированную серную кислоту при помощи дозатора со скоростью 5 см/с. Струю кислоты направляют на поверхность раствора, а не по стенке пробирки, при этом хорошо перемешивают.
Содержимое пробирки вновь тщательно перемешивают встряхиванием и оставляют в покое на 15 мин.
Охлаждают в течение 5 мин на водяной бане при температуре (20±2) °С и приступают к измерению.
Измеряют оптическую плотность раствора при длине волны 490 нм с использованием раствора сравнения, приготовленного по 6.2.2.5.
Если значение оптической плотности выше верхнего предела, указанного калибровочной кривой, повторяют измерение с использованием 2 см разбавленного раствора фильтрата вместо самого фильтрата.
Примечание - Если делается такое разбавление, то в формуле расчета по 8.1 проводят соответствующую корректировку.
7.2 Построение калибровочного графика
В четыре пробирки для анализа помещают 2 см каждого из трех градуировочных растворов по 6.2 и приливают к ним 2 см дистиллированной воды.
Измеряют оптическую плотность трех градуировочных растворов с использованием раствора сравнения, подготовленного по 6.2.2.5.
Строят калибровочный график нанесением значений массовой концентрации безводной лактозы и результатов измерения оптической плотности.
8 Обработка результатов
8.1 Массовую долю лактозы в навеске 
, %, вычисляют по формуле
,
где 
- массовая концентрация безводной лактозы, определенная по градуировочному графику, мкг/см;
- масса навески продукта, г;
- объем раствора казеина или казеината, см.
9 Метрологические характеристики
9.1 Сходимость
Разность двух результатов определений, полученных при анализе одной и той же пробы одним и тем же лаборантом за короткий промежуток времени, не должна превышать 0,03% при массовой доле лактозы менее или равной 0,2% и вероятности 
=0,95.
9.2 Воспроизводимость
Разность двух единичных и независимых результатов определений, полученных двумя лаборантами, работающими в разных лабораториях с одной и той же пробой, не должна превышать 0,04% при массовой доле лактозы менее или равной 0,2% и вероятности =0,95.
9.3 Если расхождение результатов двух параллельных определений (сходимость) превышает 0,03%, то повторно проводят два новых определения.
ПРИЛОЖЕНИЕ А (обязательное). Подготовка фильтрата
ПРИЛОЖЕНИЕ А
(обязательное)
Вид продукта | Масса навес- ки, г | Бикар- бонат натрия NaHCO | Пента- натрий- | Объем воды, см | Время выдерж- ки при нагре- вании, мин | Объем воды, см | Объем HCl H | Уксус- ная кис- лота, см | Время выдерж- ки, мин | Ацетат натрия CH |
Казеинаты | 1±0,01 | 25 | 10-15 | 15 | 8 | 1 | 5 | 1 | ||
Кислотные казеины | 1±0,01 | 0,1±0,001 | 25 | 10-15 | 15 | 8 | 1 | 5 | 1 | |
Сычужные казеины | 1±0,01 | 0,1±0,001 | 25 | 10-15 | 15 | 8 | 1 | 5 | 1 | |
Раствор сравнения для кислотного казеина | 0,1±0,001 | 25 | - | - | - | - | - | - | ||
Раствор сравнения для сычужного казеина | 0,1±0,001 | 25 | - | - | - | - | - | - |
SO