ГОСТ Р 51435-99 - Сок яблочный, cок яблочный концентрированный и напитки, содержащие яблочный сок. Метод определения содержания патулина с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии

ГОСТ Р 51435-99
(ИСО 8128-1-93)

Группа Н59

ОКС 67.160.20
ОКСТУ 9109

Дата введения 2001-01-01

1 РАЗРАБОТАН Всероссийским научно-исследовательским институтом консервной и овощесушильной промышленности (ВНИИКОП)

ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 93 "Продукты переработки плодов и овощей"

2 ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 22 декабря 1999 г. N 590-ст

3 Стандарт содержит аутентичный текст международного стандарта ИСО 8128-1-93* "Сок яблочный, сок яблочный концентрированный и напитки, содержащие яблочный сок. Определение содержания патулина. Часть 1. Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии", кроме приложения "Библиография"
_______________
* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым здесь и далее по тексту, можно получить перейдя по ссылке на сайт http://shop.cntd.ru.- Примечание изготовителя базы данных

4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

5 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Июль 2010 г.

1 Область применения

Настоящий стандарт устанавливает метод определения содержания патулина в яблочном соке, концентрированных яблочных соках и напитках, содержащих яблочный сок, с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии.

Предел обнаружения патулина настоящим методом составляет 10 мкг/дм при условии, что взятый для анализа объем пробы готового к употреблению сока составляет 5 см.

2 Сущность метода

Метод основан на экстракции патулина из исследуемой пробы этилацетатом, очистке экстракта перераспределением в водный раствор карбоната натрия и количественном и качественном анализе экстракта с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием спектрофотометрического детектора в ультрафиолетовой области.

3 Реактивы

Используют реактивы аналитической чистоты и воду квалификации "для ВЭЖХ".

3.1 Растворитель: этилацетат.

3.2 Подвижная фаза - раствор ацетонитрила в воде объемной концентрации 10%.

3.3 Экстрагирующий раствор - водный раствор безводного карбоната натрия концентрации 14 г/дм.

3.4 Ацетатный буфер, рН 4.

Смешивают 16,4 см уксусной кислоты [()=0,2 моль/дм] с 3,6 см раствора ацетата натрия [()=0,2 моль/дм].

3.5 Уксусная кислота, ледяная.

3.6 Стандартный раствор патулина ().

3.6.1 Приготовление стандартного раствора

Навеску патулина массой 10,0 мг, взятую с точностью до 0,1 мг, растворяют в мерной колбе с одной отметкой вместимостью 100 см в ацетатном буфере (3.4). Объем содержимого в колбе доводят до метки ацетатным буфером.

Пипеткой переносят 10,0 см приготовленного раствора в другую мерную колбу с одной отметкой вместимостью 100 см, объем содержимого в колбе доводят до метки ацетатным буфером. Массовая концентрация патулина в приготовленном стандартном растворе составляет около 10 мкг/см.

Измеряют оптическую плотность стандартного раствора при длине волны 276 нм на подходящем спектрофотометре с использованием кварцевых кювет рабочей длиной 10 мм.
Подробное описание Концентрированный сок у нас на сайте.

3.6.2 Расчет концентрации стандартного раствора патулина

Концентрацию стандартного раствора патулина (3.6.1) , мкг/см, вычисляют по формуле

, (1)

где - оптическая плотность стандартного раствора патулина;

- молярный показатель поглощения раствора патулина при длине волны 276 нм, дм·моль·см (=14600);

- молярная масса патулина, г/моль;

- постоянная прибора (обычно =1).

4 Приборы и лабораторное оборудование

Перед использованием лабораторное оборудование промывают раствором гипохлорита натрия концентрации 10 г/дм.

Обычное лабораторное оборудование, в частности следующее:

4.1 Жидкостный хроматограф, снабженный спектрофотометрическим детектором в ультрафиолетовой области (пригодным для работы при длине волны 276 нм) и самописцем или интегратором.

4.2 Обращенно-фазовая колонка ODS или другая аналогичная колонка со следующими параметрами:
_______________
ODS - октадецилсилан.

- эффективность не менее 35000 теоретических тарелок на метр;

- длина 250 мм;

- внутренний диаметр 4,6 мм;

- неподвижная фаза размером частиц 5 мкм.

5 Отбор проб

Проба, поступающая в лабораторию, должна быть представительной и без следов порчи или изменения свойств продукта при транспортировании и хранении.

6 Проведение испытаний

6.1 Приготовление испытуемого раствора

При испытаниях концентрированных яблочных соков их разводят водой 1:5 по объему. Дальнейшую процедуру проводят для всех продуктов одинаково, как описано ниже.

6.1.1 Пробу объемом 5,0 см экстрагируют порцией этилацетата объемом 5,0 см (3.1) в течение не менее 1 мин. Экстракцию повторяют еще два раза новыми порциями этилацетата объемом по 5,0 см. Этилацетатные фазы объединяют и экстрагируют раствором карбоната натрия (3.3) объемом 2,0 см.

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ - Экстракцию раствором карбоната натрия проводят как можно быстрее, например в течение 1-2 мин, из-за нестабильности патулина в щелочной среде.

6.1.2 Карбонатную фазу (6.1.1) экстрагируют свежей порцией этилацетата объемом 5,0 см, экстракт объединяют с предыдущими порциями. Карбонатную фазу отбрасывают. К экстракту добавляют 5 капель уксусной кислоты (3.5), смесь перемешивают и упаривают на ротационном испарителе до объема 1-2 см.

6.1.3 Полученный таким образом раствор количественно переносят во флакон вместимостью около 5 см с помощью нескольких порций этилацетата объемом около 1 см каждая. Раствор упаривают досуха в токе азота при температуре 40 °С. Остаток растворяют в 0,5 см подвижной фазы (3.2) или ацетатного буфера (3.4).

6.2 Построение градуировочного графика

Порции стандартного раствора патулина (3.6.1) объемом 1,0; 2,0; 3,0; 5,0 и 7,5 см переносят пипеткой в пять мерных колб с одной отметкой вместимостью 10 см, объем содержимого в колбах доводят до метки ацетатным буфером (3.4); получают градуировочные растворы.

Устанавливают скорость потока подвижной фазы через колонку жидкостного хроматографа около 1 см/мин. Чувствительность детектора хроматографа устанавливают таким образом, чтобы оптической плотности 0,01 соответствовал сигнал величиной на полную шкалу регистрирующего устройства.

В хроматограф (4.1) вводят от 0,010 до 0,030 см каждого градуировочного раствора.

Градуировочный график строят, откладывая по оси абсцисс концентрацию патулина в микрограммах на кубический сантиметр, по оси ординат - соответствующие величины высоты или площади пиков.

6.3 Проведение определения

В хроматограф вводят от 0,010 до 0,030 см испытуемого раствора (6.1.3) при тех же условиях, что и при построении градуировочного графика.

Идентификацию пика патулина в испытуемом растворе проводят сравнением с пиками патулина в градуировочных растворах. Следует отличать пик патулина от пика оксиметилфурфурола (ОМФ).

7 Обработка результатов

Концентрацию патулина в испытуемом растворе определяют непосредственно по градуировочному графику (6.2). Содержание патулина в продукте , мкг/дм, вычисляют по формуле

, (2)

где - концентрация патулина в испытуемом растворе, определенная по градуировочному графику, мкг/см;

- объем, до которого сконцентрирован этилацетатный экстракт, см;

- объем пробы продукта, взятый для экстракции, см.

8 Точность метода

8.1 Сходимость результатов

=41,9 мкг/дм; =14,9 мкг/дм,

где - предел сходимости;

- среднеквадратическое отклонение сходимости.

8.2 Воспроизводимость результатов

=47,5 мкг/дм; =22,6 мкг/дм,

где - предел воспроизводимости;

- среднеквадратическое отклонение воспроизводимости.

9 Протокол испытаний

В протоколе испытаний указывают:

- метод испытаний;

- результат испытаний;

- окончательный результат с оценкой сходимости, если была проверена сходимость результатов.

Также следует отметить особенности проведения испытаний, не указанные в настоящем стандарте или рассматриваемые как несущественные, с побочными обстоятельствами, способными повлиять на результат испытаний.

Протокол испытаний должен содержать информацию, необходимую для полной идентификации образца.

_______________________________________________________________________________________
УДК 664.863.001.4:006.354 ОКС 67.160.20 Н59 ОКСТУ 9109

Ключевые слова: яблочный сок, концетрированный яблочный сок, напитки, содержащие яблочный сок, патулин, определение содержания, высокоэффективная жидкостная хромотография
_______________________________________________________________________________________