ГОСТ 9.082-77 - Единая система защиты от коррозии и старения. Масла и смазки. Методы лабораторных испытаний на стойкость к воздействию бактерий

ГОСТ 9.082-77

Группа Т99

МКС 19.040
75.100

Дата введения 1979-01-01

Постановлением Государственного комитета стандартов Совета Министров СССР от 5 декабря 1977 г. N 2804 дата введения установлена 01.01.79

Ограничение срока действия снято Постановлением Госстандарта СССР от 22.10.90 N 2659

ИЗДАНИЕ с Изменением N 1, утвержденным в октябре 1990 г. (ИУС 1-91)

Настоящий стандарт распространяется на масла и смазки и устанавливает исследовательские лабораторные методы испытаний на стойкость к воздействию бактерий.

1. МЕТОД 1

1.1. Сущность метода заключается в выдерживании образцов зараженных водной суспензией бактерий в условиях, оптимальных для развития бактерий, без дополнительного источника минерального и органического питания.

Метод применяют для определения бактериостойкости масел и смазок при отсутствии минеральных и органических загрязнений.

1.2. Отбор образцов

1.2.1. Масла и смазки отбирают по ГОСТ 2517-85 в количестве 10-15 г.

1.2.2. Образцами являются масла и смазки в соответствии поставки без специальной очистки и стерилизации.

1.2.3. Количество образцов должно быть не менее пяти.

1.2.4. Штаммы бактерий

1.2.4.1. Для испытаний применяют смесь штаммов чистых культур бактерий:

	Bacillus subtilis	ВКМВ-1665Д,
	Bacillus pumilus	ВКМВ-1664Д,
	Bacillus stearothermophilus	ВКМВ-1668Д,
	Bacillus coagulans	ВКМВ-1669Д.

1.2.4.2. Чистые культуры бактерий получают во Всесоюзной коллекции микроорганизмов института биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР, поддерживают периодическим пересевом и выращивают непосредственно перед испытаниями. Культуры бактерий обновляют один раз в год-два.

1.2.4-1.2.4.2. (Измененная редакция, Изм. N 1).

1.2.4.3. Пересев, выращивание и хранение культур бактерий проводят, как указано в приложении 1.

1.3. Аппаратура, материалы и реактивы - по ГОСТ 9.048-89.

Масло МК-8 по ГОСТ 6457-66.

Масло МС-8 рк по ОСТ 38.01387-85.

Масло МС-8 п по ОСТ 38.101163-78.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

1.4. Подготовка к испытаниям

1.4.1. Посуду и материалы готовят по ГОСТ 9.048-89.

1.4.2. Среды для выращивания и хранения чистых культур бактерий и для испытаний готовят по ГОСТ 9.048-89 и приложению 2.

Рецептура сред приведена в таблице.

Наименование реактивов	Количество для среды
	1- Чапека- Докса с агаром	2 - Чапека- Докса с агаром без сахарозы	3 - из выще- лоченного агара	4 - МПА	5 - Чапека- Докса без сахарозы	6 - Чапека- Докса	7 - БСА
1. Калий фосфорнокислый однозамещенный, г	0,7	0,7	-	-	0,7	0,7	-
2. Калий фосфорнокислый двузамещенный, г	0,3	0,3	-	-	0,3	0,3	-
3. Магний сернокислый, г	0,5	0,5	-	-	0,5	0,5	-
4. Натрий азотнокислый, г	2,0	2,0	-	-	2,0	2,0	-
5. Калий хлористый, г	0,5	0,5	-	-	0,5	0,5	-
6. Железо сернокислое, г	0,01	0,01	-	-	0,01	0,01	-
7. Сахароза, г	30,0	-	-	-	-	30,0	-
8. Агар-агар, г	20,0	Выще- лоченный 20,0	Выще- лоченный 20,0	20,0	-	-	20,0
9. Мясо-пептонный бульон, см	-	-	-	До 1000	-	-	500,0
10. Четырех- баллинговое неохмеленное пивное сусло (4% сахара), см	-	-	-	-	-	-	480,0
11. Вода дистиллированная, см	До 1000	До 1000	До 1000	-	До 1000	До 1000	-

1.4.3. Чистые культуры бактерий пересевают и выращивают, как указано в приложении 1.

1.4.4. Для контроля жизнеспособности бактерий в чашку Петри наливают среду 4 в количестве 20-30 см и дают ей застыть.

1.4.5. Для размещения образцов смазок среду 3 наливают в чашку Петри в количестве 20-30 см и дают ей застыть.

1.4.6. Для размещения образцов масел готовят лунки, для чего в застывшей среде 3 стерильным сверлом диаметром 10 мм просверливают пять лунок глубиной около 5 мм.

1.5. Проведение испытаний

1.5.1. Суспензию бактерий готовят, как указано в приложении 3.

1.5.2. Для заражения образцов используют водную суспензию смеси бактерий.

1.5.3. Образцы смазок наносят скальпелем в количестве пяти кусочков размером 10х10 мм толщиной 1,5-2,0 мм на поверхность среды в чашку Петри, приготовленную, как указано в п.1.4.5.

1.5.4. Образцы масел наливают в лунки (на 1 мм ниже уровня среды), приготовленные, как указано в п.1.4.6.

1.5.5. Чашка Петри с образцами и контрольные чашки Петри, приготовленные, как указано в пп.1.4.4 и 1.4.5, помещают в бокс. Поверхность образцов и сред заражают водной суспензией смеси бактерий пульверизатором, не допуская слияния капель.

1.5.6. Чашки Петри с зараженными образцами и контрольные чашки (п.1.4.4) помещают в эксикатор, на дно которого налита вода. Эксикатор устанавливают в термостат с температурой (29±2) °С.

1.5.7. Образцы выдерживают в термостате 56 сут.

1.5.8. Через 1-3 сут после начала испытаний осматривают контрольную чашку Петри.

Если на поверхности среды рост бактерий и образование пигмента не наблюдается, культуры бактерий считают нежизнеспособными. Испытания прекращают и повторяют их на новых образцах с вновь приготовленной суспензией бактерий из новой партии бактерий.

1.5.9. Через 28 сут проводят промежуточный осмотр образцов. Испытания образцов, на которых обнаруживают развитие бактерий, прекращают.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

1.5.10. По окончании испытаний чашки Петри извлекают из эксикатора и осматривают образцы.

1.6. Обработка результатов

1.6.1. Образцы масел и смазок осматривают через лупу при 2,5-7-кратном увеличении.

1.6.2. Масла и смазки считают бактериостойкими при отсутствии развития бактерий и пигментации на всех испытанных образцах.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2. МЕТОД 2

2.1. Сущность метода заключается в выдерживании образцов зараженных водной суспензией бактерий в условиях, оптимальных для развития бактерий, на среде с дополнительным источником минерального питания.

Метод применяют для определения бактериостойкости масел и смазок в условиях, имитирующих минеральные загрязнения.

2.2. Отбор образцов - по п.1.2.

2.2.1. Виды бактерий - по п.1.2.4.

2.3. Аппаратура, материалы и реактивы - по ГОСТ 9.048-89.

2.4. Подготовка к испытаниям - по пп.1.4.2-1.4.4.

2.4.1. Для размещения образцов смазок среду 2 (см. табл.) наливают в чашку Петри в количестве 20-30 см и дают ей застыть.

2.4.2. Для размещения образцов масел готовят лунки, как указано в п.1.4.6, используя среду 2.

2.4.3. (Исключен, Изм. N 1).

2.5. Проведение испытаний

2.5.1. Образцы смазок наносят, как указано в п.1.5.3, на поверхность среды в чашку Петри, приготовленную по п.2.4.1.

2.5.2. Образцы масел наливают в лунки, приготовленные, как указано в п.2.4.2, в соответствии с требованиями п.1.5.4.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.5.3. (Исключен, Изм. N 1).

2.5.4. Дальнейший порядок проведения испытаний соответствует требованиям пп.1.5.5 и 1.5.6.

2.5.5. Образцы выдерживают в термостате 28 сут.

2.5.6. Дальнейший порядок проведения испытаний соответствует требованиям пп.1.5.8-1.5.10 с промежуточным осмотром образцов через 7-14 сут.

2.6. Обработка результатов - по п.1.6.

2.7. Испытание масел допускается проводить по ГОСТ 9.052-88, метод 3. Вместо культур грибов по ГОСТ 9.052-88 используют бактериальные культуры по п.1.2.4. Отбор для оценки бактериостойкости масел проводят через каждые сутки.

(Введен дополнительно, Изм. N 1).

3. МЕТОД 3

3.1. Сущность метода заключается в выдерживании образцов зараженных водной суспензией бактерий в условиях, оптимальных для развития бактерий, на среде с дополнительным источником минерального и органического питания.

Метод применяют для определения бактериостойкости масел и смазок в условиях, имитирующих минеральные и органические загрязнения.

3.2. Отбор образцов - по п.1.2.

3.2.1. Виды бактерий - по п.1.2.4.

3.3. Аппаратура, материалы и реактивы - по ГОСТ 9.048-89.

3.4. Подготовка к испытаниям - по п.1.4.

3.4.1. Для размещения образцов смазок готовят чашки Петри, как указано в п.2.4.1, используя среду 4.

3.5. Проведение испытаний - по п.1.5.

3.5.1. Образцы выдерживают в термостате в условиях, указанных в п.1.5.6, 14 сут.

3.5.2. Промежуточный осмотр образцов проводят через 7 сут после начала испытаний.

3.6. Обработка результатов - по п.1.6.

4. ТРЕБОВАНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ

ПРИЛОЖЕНИЕ 1 (обязательное). ПЕРЕСЕВ, ВЫРАЩИВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ КУЛЬТУР БАКТЕРИЙ

ПРИЛОЖЕНИЕ 1
Обязательное

1. Пересев культур бактерий

1.1. Пересев культур бактерий проводят в специальном боксе, предварительно продезинфицированном.

1.2. На пробирках, приготовленных для пересева, обозначают виды бактерий, ставят дату пересева, которую заносят в журнал регистрации пересева культур бактерий.

1.3. Пересев культур бактерий в пробирки со стерильной питательной средой проводят при помощи бактериологической петли. Петлю изготавливают из проволоки (платина, хром, никель, молибден) диаметром (0,6±0,1) мм, длиной (120±20) мм, укрепленной в стеклянном или металлическом держателе.

1.4. Пробирки, засеянные бактериями, помещают в термостат при температуре (29±2) °С и выдерживают в нем три-четыре дня до появления хорошего роста и пигментации.

1.5. Чистоту выросшей культуры контролируют визуально и микроскопированием.

1.4, 1.5. (Измененная редакция, Изм. N 1).

2. Выращивание и хранение культур бактерий

2.1. Чистые культуры бактерий для проведения испытаний выращивают и хранят в пробирке со скошенной поверхностью питательной среды.

Допускается хранить их в виде суспензии в среде 5 п.1.4.2 в пробирках под слоем минеральных масел МК-8, или МС-8рк, или МС-8п толщиной 1 см.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.2. Культуры бактерий пересевают в пробирки для получения музейных партий.

Примечание. Музейные партии предназначены для сохранения чистых культур и получения из них рабочих партий.

2.3. Количество музейных партий рекомендуется иметь от 3 до 5 в зависимости от объема проводимых испытаний в течение месяца.

2.4. Пересев музейных культур необходимо проводить 1 раз в 3 мес.

2.5. Для выращивания культур бактерий используют среду мясопептонного агара (МПА) или среду 7-БСА.

2.4, 2.5. (Измененная редакция, Изм. N 1).

2.6. Пробирки с чистыми культурами бактерий хранят в холодильнике при температуре (7±3) °С.

2.7. Допустимый срок хранения культур - 6 мес.

ПРИЛОЖЕНИЕ 2 (обязательное). ПРИГОТОВЛЕНИЕ МЯСО-ПЕПТОННОГО АГАРА

ПРИЛОЖЕНИЕ 2
Обязательное

1. Для приготовления мясо-пептонного агара (МПА) можно использовать мясо-пептонный бульон (МПБ). Основой для его приготовления является мясная вода, которую обычно готовят следующим образом: 500 г мяса, освобожденного от костей, жира и сухожилий, разрезают на мелкие куски (или пропускают через мясорубку), заливают 1 л водопроводной воды и оставляют при комнатной температуре на 12 ч, или в термостате при 30 °С на 6 ч, или при 37 °С - на 2 ч. В это время из мяса экстрагируются различные вещества, в том числе водорастворимые витамины. Затем мясо отжимают через марлю или полотно и фильтрат кипятят 5 мин. При этом свертываются белки. Остывшую массу фильтруют без перемешивания через ватный фильтр и добавляют воды до первоначального объема. К мясной воде добавляют 1% пептона и 0,5% поваренной соли.

2. К МПБ, бульону Хоттингера или разбавленному гидролизату Хоттингера добавляют 2-3% агар-агара. рН МПА должен быть 7±0,2. Стерилизуют при 1 атм. Стерильная среда может храниться в течение 1-2 месяцев.

3. Для приготовления МПА можно также использовать бульон Хоттингера (180 мг % аминого азота) или гидролизат Хоттингера (800 мг % аминого азота). Для приготовления МПА гидролизат Хоттингера разбавляют в четыре-пять раз.

ПРИЛОЖЕНИЕ 3 (обязательное). ПРИГОТОВЛЕНИЕ СУСПЕНЗИЙ БАКТЕРИЙ И КОНТРОЛЬ ЖИЗНЕСПОСОБНОСТИ БАКТЕРИЙ

ПРИЛОЖЕНИЕ 3
Обязательное

1. Для приготовления суспензии клеток используют культуры бактерий возрастом от 2 до 5 сут, считая с момента пересева.

2. Суспензию клеток с концентрацией 1-2 млн/см готовят отдельно для каждого вида бактерий. Для этого в пробирку или колбу, содержащую (20±5) см стерильной воды, переносят клетки бактерий из пробирки с чистой культурой.

3. Перенос бактериальных клеток из пробирки в колбу осуществляется захватом клеток бактериологической петлей.

4. Приготовленные в соответствии с требованиями пп.1-3 суспензии бактерий смешивают в равных объемах и используют для заражения образцов.

5. Срок хранения суспензии бактерий не более 4 ч с момента их приготовления.

ГОСТ 9.082-77 Единая система защиты от коррозии и старения. Масла и смазки. Методы лабораторных испытаний на стойкость к воздействию бактерий