ГОСТ 28087-89
Группа Р31
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
ВАКЦИНА ПРОТИВ БОТУЛИЗМА НОРОК
Технические требования и методы контроля
Vaccine for mink botulism. Technical requirements and methods of control
МКС 11.220
ОКСТУ 9382
Дата введения 1990-01-01
ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ
1. РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Госагропромом СССР
2. УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 31.03.89 N 916
3. Стандарт полностью соответствует СТ СЭВ 6282-88
4. ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
5. ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ
Обозначение НТД, на который дана ссылка | Номер пункта |
ГОСТ 9284-75 | 2.4.1 |
ГОСТ 13739-78 | 2.4.1 |
ГОСТ 22967-90 | 2.6.1, 2.7.1 |
ГОСТ 25377-82 | 2.6.1, 2.7.1 |
ГОСТ 28085-89 | 2.5.1 |
6. Ограничение срока действия снято по протоколу N 4-93 Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации (ИУС 4-94)
7. ПЕРЕИЗДАНИЕ. Май 2007 г.
Настоящий стандарт распространяется на вакцину против ботулизма норок, изготовленную из культуры штамма Сl.botulinum типа С-альфа, инактивированную формалином и осажденную алюмокалиевыми квасцами и предназначенную для профилактической иммунизации норок.
1. ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ
1. ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ
По физико-химическим и иммунобиологическим свойствам вакцина должна соответствовать требованиям и нормам, указанным в табл.1.
Таблица 1
Наименование показателя | Характеристика и норма |
1. Внешний вид | Суспензия серовато-белого цвета, после отстаивания на дне флакона выпадает рыхлый осадок светло-серого цвета, легко разбивающийся при встряхивании в гомогенную взвесь. Не допускается наличие примесей, плесени, неразбившихся хлопьев, трещин флаконов |
2. Концентрация водородных ионов (рН) | 7,0-7,2 |
3. Типичность микрофлоры | В мазках, окрашенных по Граму, крупные (4,6х0,8-1,2 мкм) грамположительные палочки с закругленными концами, овальные споры или палочки со спорой, имеющие характерную форму теннисной ракетки |
4. Стерильность | В посевах из вакцины на питательных средах не должно быть роста бактериальной и грибковой микрофлоры |
5. Безвредность | Подкожное введение вакцины белым мышам в дозе 1 cм |
6. Иммуногенная активность | Доза вакцины в количестве 0,071-0,21 см |
2. МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЙ
2.1. Отбор проб
2.1.1. Для проверки качества вакцины против ботулизма норок из разных мест каждой серии отбирают 20 флаконов, из которых 10 используют для проведения испытания, а 10 - хранят в архиве государственного контролера в пределах срока годности препарата.
2.1.2. Пробы, направляемые в архив, опечатывают и снабжают документом установленной формы с указанием:
наименования биопрепарата;
даты изготовления;
номера серии;
номера контроля;
даты отбора проб;
объема серии;
срока годности;
обозначения настоящего стандарта;
должности и подписи лица, отобравшего пробу.
2.2. Определение внешнего вида
Внешний вид определяют визуально. Каждый флакон с вакциной встряхивают, просматривают в проходящем свете и одновременно проверяют герметичность укупорки, наличие трещин и правильность этикетирования.
2.3. Определение концентрации водородных ионов (рН)
Для проведения испытания используют два флакона с вакциной.
Концентрацию водородных ионов вакцины определяют электрометрическим методом, применяя потенциометры. Порядок определения - в соответствии с правилами, приложенными к прибору.
2.4. Определение типичности микрофлоры
Сущность метода заключается в определении типичности микрофлоры при микроскопическом исследовании окрашенных мазков из вакцины.
2.4.1. Аппаратура и материалы
Микроскоп биологический с иммерсионной системой по НТД.
Стекла предметные по ГОСТ 9284.
Масло иммерсионное по ГОСТ 13739.
Набор бактериологических красок.
2.4.2. Проведение испытания
Мазки готовят на предметных стеклах из 3 флаконов с вакциной. Мазки окрашивают по Граму и просматривают под иммерсионной системой микроскопа.
2.4.3. Обработка результатов
Наличие грамположительных палочек с закругленными концами, овальных спор или палочек со спорой в форме теннисной ракетки свидетельствует о типичности данной микрофлоры.
2.5. Определение стерильности
Сущность метода заключается в определении отсутствия роста бактериальной и грибковой микрофлоры в посевах из вакцины на питательные среды.
2.5.1. Аппаратура, материалы и реактивы - по ГОСТ 28085.
2.5.2. Проведение испытания
Для определения стерильности используют 10 флаконов с вакциной. Перед проведением испытания флаконы с вакциной встряхивают до получения гомогенной взвеси.
Испытание проводят путем посева из каждого флакона по 1,0 см
вакцины в 3 пробирки с МПБ, МПА, МППБ под вазелиновым маслом, агаром Сабуро или Чапека и по 2,0 см в два флакона с МПБ и МППБ под вазелиновым маслом.
Через 20 сут инкубирования из посевов во флаконах проводят пересев на все вышеуказанные среды.
2.5.3. Обработка результатов
Отсутствие роста бактериальной и грибковой микрофлоры в посевах вакцины на питательных средах после их выдерживания в термостате в течение 35 сут и в пересевах в течение 15 сут при температуре (37±0,5) °С, для среды Сабуро или Чапека при (22±1) °С, свидетельствует о стерильности вакцины.
2.6. Определение безвредности
Сущность метода заключается в определении реакции у лабораторных животных на введение вакцины в тест-дозе.
2.6.1. Аппаратура и материалы
Шприцы вместимостью 2 и 5 см по ГОСТ 22967.
Иглы инъекционные по ГОСТ 25377*.
________________
* ГОСТ 25377-82 действует только на территории Российской Федерации (здесь и далее).
Флаконы стеклянные вместимостью 200 см.
Пипетки стеклянные мерные вместимостью 1, 5 и 10 см.
2.6.2. Подготовка к испытанию
Для проведения испытания используют 10 флаконов с вакциной. Из каждого флакона после тщательного встряхивания отбирают по 5-10 см вакцины в стерильной флакон, объединяя пробы.
2.6.3. Проведение испытания
Для определения безвредности вакцины используют белых мышей живой массой 18-20 г и морских свинок живой массой 350-400 г. Десяти белым мышам вакцину вводят подкожно в области спины по 1 см и пяти морским свинкам подкожно в области живота по 2 см.
2.6.4. Обработка результатов
Вакцину считают безвредной, если в течение 10 сут после ее введения не наступает гибель или заболевание животных. Допускается на месте введения вакцины образование припухлости.
2.7. Определение иммуногенной активности
Сущность метода заключается в определении специфической активности вакцины в сравнении с референс-препаратом.
2.7.1. Аппаратура и реактивы
Шприцы вместимостью 1 см по ГОСТ 22967.
Иглы инъекционные по ГОСТ 25377.
Флаконы стеклянные вместимостью 100 см.
Пипетки стеклянные мерные вместимостью 5 и 10 см.
Референс-препарат сухой.
Токсин ботулический типа С.
2.7.2. Подготовка к испытанию
Для определения иммуногенной активности вакцины используют 10 флаконов с вакциной. Объединенную пробу вакцины для испытания готовят по п.2.6.2.
2.7.3. Проведение испытания
Иммуногенную активность вакцины определяют на белых мышах живой массой 18-20 г в параллельном опыте в сравнении с референс-препаратом.
Референс-препарат представляет собой сухую вакцину против ботулизма норок, фасованную в ампулы по 2 cм, с определенной иммуногенностью.
Вакцину и референс-препарат вводят однократно подкожно двум группам белых мышей по 40 голов в каждой группе. Одну группу белых мышей вакцинируют испытуемой вакциной, а вторую группу референс-препаратом. Мышей обеих групп иммунизируют дозами 0,05; 0,1; 0,2 и 0,4 см, используя по 10 белых мышей на каждую дозу испытуемой вакцины и референс-препарата.
Через 21 сут после вакцинации животным обеих групп вводят подкожно ботулический токсин типа С в дозе 10 ДЛМ. Одновременно токсин вводят 5 контрольным белым мышам такой же живой массой в дозе по 1 ДЛМ, которым не вводилась испытуемая вакцина и референс-препарат. Результаты учитывают в течение 120 ч с момента введения токсина.
2.7.4. Обработка результатов
Подсчитывают по каждой дозе в группе животных, вакцинируемых испытуемой серией вакцины, и группе животных, привитых референс-препаратом, отношение количества выживших животных к их числу, взятому для опыта.
Значения отношений суммируют по каждой группе отдельно.
По сумме отношений по табл.2 находят дозу испытуемой серии вакцины и дозу референс-препарата, предохраняющих от гибели 50% вакционированных белых мышей, а также прививочную дозу для норок.
Таблица 2
Сумма отношений | Доза вакцины, предохраняющая от гибели 50% вакцинированных белых мышей, см | Доза вакцины для норок, см |
1,4 | 0,21 | 2,0 |
1,5 | 0,20 | |
1,6 | 0,18 | |
1,7 | 0,17 | 1,5 |
1,8 | 0,16 | |
1,9 | 0,15 | |
2,0 | 0,14 | |
2,1 | 0,13 | |
2,2 | 0,12 | 1,0 |
2,3 | 0,11 | |
2,4 | 0,1 | |
2,5 | 0,1 | |
2,6 | 0,093 | |
2,7 | 0,087 | |
2,8 | 0,082 | |
2,9 | 0,075 | |
3,0 | 0,071 |
Результат контроля считают достоверным, если сумма отношений, полученная в группе животных, вакционированных референс-препаратом, находится в пределах 2,3-2,7. Если эта сумма отношений не соответствует указанным пределам, проводят контроль испытуемой серии вакцины на таком же количестве белых мышей.
Вакцину считают активной, если однократная ИД
для белых мышей составляет 0,071- 0,21 см при гибели 60% -100% контрольных животных. Указанные дозы вакцин соответствуют прививочным дозам вакцин для норок в количестве от 1 до 2 см.
Пример определения иммуногенной активности вакцины приведен в приложении.
ПРИЛОЖЕНИЕ (справочное). Данные по учету результатов опыта по группам животных, вакцинируемых испытуемой серией вакцины, и животных, привитых референс-препаратом
ПРИЛОЖЕНИЕ
Справочное
В табл.3 и 4 приведены данные по учету результатов опыта по группам животных, вакцинируемых испытуемой серией вакцины, и животных, привитых референс-препаратом.
Таблица 3
Доза испытуемой серии вакцины, см | Количество мышей в опыте | Количество мышей, | Отношение выживших мышей к числу взятых в опыт | Сумма отношений |
0,05 | 10 | 5 | 0,5 | 2,8 |
0,1 | 10 | 6 | 0,6 | |
0,2 | 10 | 7 | 0,7 | |
0,4 | 10 | 10 | 1,0 |
Таблица 4
Доза референс- | Количество мышей в опыте | Количество мышей, | Отношение выживших мышей к числу взятых в опыт | Сумма отношений |
0,05 | 10 | 1 | 0,1 | 2,4 |
0,1 | 10 | 3 | 0,3 | |
0,2 | 10 | 10 | 1,0 | |
0,4 | 10 | 10 | 1,0 |
Используя сумму отношений числа выживших животных к числу животных, взятых для опыта по каждой группе, по табл.2 определяют значение дозы испытуемой серии вакцины и референс-препарата.
В данном примере референс-препарат защищает 50% иммунизированных животных в дозе 0,1 см, а испытуемая серия вакцины - в дозе 0,082 см. В приведенном примере доза испытуемой вакцины для норок будет составлять 1 см.