ГОСТ 27146-86(СТ СЭВ 5157-85)
Группа Р31
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР
АНТИГЕН ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ИНФЕКЦИОННОГО ЭПИДИДИМИТА БАРАНОВ, ВЫЗЫВАЕМОГО БРУЦЕЛЛОЙ ОВИС
Технические требования и методы испытаний
Antigen revealing infectious sheep's epididymitis caused by Brucella ovis. Technical requirements and test methods
ОКСТУ 9382
Срок действия с 01.01.88
до 01.01.93*
______________________________
* Ограничение срока действия снято
постановлением Госстандарта России
от 30.06.92 N 620 (ИУС N 9, 1992 год). -
Примечание изготовителя базы данных.
ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ
1. РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Госагропромом СССР
ИСПОЛНИТЕЛИ:
К.В.Шумилов, канд. вет. наук (руководитель темы); У.Э.Ниязов, канд. вет. наук; Т.И.Малахова, канд. вет. наук
2. УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 11 декабря* N 3761
________________
* Текст документа соответствует оригиналу. - Примечание изготовителя базы данных.
3. ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
4. ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ
Обозначение НТД, на который дана ссылка | Номер пункта, подпункта, перечисления, приложения |
ГОСТ 3164-68* | 2.3.1 |
ГОСТ 4233-77 | 2.3.1 |
ГОСТ 13805-76 | 2.3.1 |
ГОСТ 16280-70 | 2.3.1 |
ГОСТ 17206-84 | 2.3.1 |
ГОСТ 20292-74 | 2.3.1; 2.4.1 |
ГОСТ 20730-75 | 2.3.1 |
ГОСТ 25336-82 | 2.3.1; 2.4.1 |
________________
* Вероятно, ошибка оригинала. Следует читать: ГОСТ 3164-78. - Примечание изготовителя базы данных.
Настоящий стандарт распространяется на антиген, предназначенный для диагностики инфекционного заболевания овец, вызываемого Бруцеллой овис, методом реакции длительного связывания комплемента (РДСК).
Стандарт полностью соответствует СТ СЭВ 5157-85.
1. ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ
1. ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ
1.1. Антиген по своим физическим и биологическим свойствам должен соответствовать характеристикам и нормам, указанным в табл.1.
Таблица 1
Наименование показателя | Характеристика и норма |
1. Внешний вид | Прозрачная, слегка опалесцирующая жидкость зеленовато-желтого цвета |
2. Наличие посторонней примеси, плесени, хлопьев, осадка, трещин флаконов | Не допускается |
3. Стерильность | В посевах из антигена на питательные среды не должно быть роста микрофлоры после выдерживания в течение 10 дней при температуре (37±0,5) °С, на агаре Сабуро при температуре (22±2) °С |
4. Активность в РДСК | Титр не ниже 1:200 с оценкой "три-четыре креста"; рабочий титр 1:100 |
5. Специфичность в РДСК | Антиген в разведении 1:50 и выше не должен вызывать задержки гемолиза эритроцитов с S-бруцеллезной и нормальными сыворотками |
6. Антикомплементарные свойства | Антиген в разведении 1:50 и выше не |
7. Гемотоксичность | Антиген в разведении 1:50 и выше не должен обладать гемотоксическими свойствами |
2. МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЙ
2.1. Отбор проб
2.1.1. Для проведения испытания от каждой серии отбирают десять флаконов. Пять флаконов используют для анализа, а пять - хранят в архиве государственного контролера в течение 18 мес.
2.1.2. Флаконы, предназначенные для хранения, сопровождают документом с указанием:
наименования препарата;
даты изготовления;
номера серии;
номера контроля;
даты отбора пробы;
общего количества упаковочных единиц и объема серии;
должности и подписи лица, отобравшего пробу;
обозначения настоящего стандарта.
2.2. Определение внешнего вида, цвета и наличия посторонней примеси
Для определения внешнего вида, цвета, наличия посторонней примеси, плесени, хлопьев, осадка каждый флакон с препаратом встряхивают и просматривают в проходящем свете.
2.3. Определение стерильности
Сущность метода заключается в определении роста бактериальной и грибковой микрофлоры в посевах из проб антигена на питательных средах.
2.3.1. Аппаратура, материалы и реактивы
Для проведения испытания применяют:
термостаты с температурой нагрева (22±2) °С и (37±0,5) °С;
пипетки мерные вместимостью 1 и 2 см
по ГОСТ 20292-74;
пробирки по ГОСТ 25336-82;
флаконы стеклянные вместимостью 100 см;
бульон мясо-пептонный (МПБ) по ГОСТ 20730-75;
бульон мясо-пептонный печеночный (МППБ) под вазелиновым маслом;
агар мясо-пептонный (МПА);
пептон сухой ферментативный по ГОСТ 13805-76;
агар микробиологический по ГОСТ 17206-84* или агар пищевой по ГОСТ 16280-70**;
________________
* На территории Российской Федерации документ не действует. Действует ГОСТ 17206-96;
** На территории Российской Федерации документ не действует. Действует ГОСТ 16280-2002. - Примечания изготовителя базы данных.
масло вазелиновое по ГОСТ 3164-78;
раствор физиологический, pH 7,0-7,2;
агар Сабуро;
натрий хлористый по ГОСТ 4233-77.
2.3.2. Проведение испытания
Посев проводят из каждого отобранного для испытания флакона в объеме 0,2-0,3 см в пробирки с МПА, МПБ, МППБ под вазелиновым маслом, агаром Сабуро и по 0,5-1 см во флаконы с МПА и МППБ под вазелиновым маслом. Посевы проводят в две пробирки и два флакона с каждой средой. Питательные среды с посевами выдерживают при температуре (37±0,5) °С, а на агаре Сабуро при температуре (22±2) °С в течение 10 дней. В посевах на питательных средах не должно быть роста бактериальной микрофлоры и грибов.
2.4. Определение активности, специфичности, гемотоксичности и антикомплементаpных свойств
Сущность метода заключается в способности антигена образовывать комплекс со специфическими антителами, выявляемый в РДСК.
2.4.1. Аппаратура и материалы
Для проведения испытания применяют:
баню водяную с температурой 38 °С и 62-64 °С;
холодильник, поддерживающий температуру 2-4 °С;
пробирки по ГОСТ 25336-82;
штативы;
пипетки мерные вместимостью 1, 2, 5 и 10 см по ГОСТ 20292-74;
колбы мерные вместимостью 100, 200 и 1000 см по ГОСТ 20292-74;
воронки стеклянные по ГОСТ 25336-82;
полиглобулин для стандартизации овисных антигенов или референтную овисную сыворотку с титром в РДСК 1:20 четыре креста (+ + + + );
две нормальные сыворотки крови баранов разных серий;
S-бруцеллезную сыворотку с титром в РДСК 1:40 четыре креста ( + + + +);
Таблица 2
Титрация овисного антигена
Компоненты реакции | Разведения антигена | Контроль- | Контроль- | Без анти- | |||||||
1:50 | 1:100 | 1:150 | 1:200 | 1:250 | 1:300 | 1:350 | 1:400 | ||||
Разведения полиглобулина или референтной овисной сыворотки, см | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 1,0 |
Выдерживают в водяной бане при температуре 62-64 °С в течение 30 мин | |||||||||||
Испытуемый и контрольный антиген, см | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | - |
Коплемент в разведении по титру, см | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 |
Выдерживают при температуре 2-4 °С в течение 16-18 ч, затем при комнатной температуре в течение 20 мин | |||||||||||
Гемолитическая система в рабочем титре (см.табл.4), см | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 |
Выдерживают в водяной бане при температуре 37-38 °С в течение 20 мин | |||||||||||
Таблица 3
Титрация овисного антигена и примерный результат
Компоненты реакции | Разведе- | Разведения антигена | Конт- | Конт- | Без антигена | |||||||
1:50 | 1:100 | 1:150 | 1:200 | 1:250 | 1:300 | 1:350 | 1:400 | |||||
Полиглобулин или референтная овисная сыворотка | 1:10 | ++ | ++ | ++ | ++ | +++ | ++ | + | - | ++ | - | - |
S-бруцеллезная сыворотка | 1:5 | - | - | - | - | - | - | - | - | - | ++ | - |
1:10 | - | - | - | - | - | - | - | - | - | ++ | - | |
Негативная сыворотка 1-я | 1:5 | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - |
Негативная сыворотка 2-я | 1:5 | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - |
Антикомплементарность антигена | (В двойной дозе) | - | - | Реакцию не проводят | - | - | - | |||||
Гемотоксичность антигена | (В двойной дозе) | ++ | ++ | То же | ++ | ++ | Реакцию не проводят | |||||
Таблица 4
Титрация гемолитической системы для реакции длительного связывания комплемента
Компоненты | Дозы компонентов в пробирках, см | |||||||||
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | |
Негативная сыворотка в разведении 1:5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 |
Выдерживают в водяной бане при температуре 62-64 °С в течение 30 мин | ||||||||||
Антиген в рабочем титре | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 |
Комплемент (в том же разведении, как для главного опыта) | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 |
Выдерживают при температуре 2-4 °С в течение 16-18 ч, затем в течение 20 мин при комнатной температуре 16-24 °С | ||||||||||
Гемолитическая | 0,2 | 0,4 | 0,6 | 0,8 | 1,0 | 1,2 | 1,4 | 1,6 | 1,8 | 2,0 |
Выдерживают в водяной бане при температуре 37-38 °С в течение 20 мин | ||||||||||
Результат | ПГ | ПГ | ПГ | ПГ | ПГ | ПГ | ЧГ | ЧГ | ЧГ | ЗГ |
Общий титр гемолитической системы - 1,2 см
Рабочий титр - 1,0 см
Примечание. ПГ - полный гемолиз, ЧГ - частичный гемолиз, 3Г - задержка гемолиза. Опыт проводится параллельно с двумя негативными сыворотками.
антиген бруцеллезный для РА, РСК (РДСК);
комплемент для РСК;
сыворотку гемолитическую для РСК;
эритроциты барана, 3-4%-ную взвесь в физиологическом растворе;
физиологический раствор, pH 7,0-7,2.
2.4.2. Проведение испытания
Определение активности, специфичности, гемотоксичности и антикомплементарных свойств антигена проводят в РДСК по табл.2 и 3.
Для испытания в РДСК испытуемый антиген разводят физиологическим раствором в соотношении 1:50, 1:100, 1:150, 1:200, 1:250, 1:300, 1:350, 1:400; полиглобулин или референтную овисную сыворотку - в разведении 1:10; S - бруцеллезную сыворотку - в разведении 1:5 и 1:10; две нормальные сыворотки крови баранов разных серий - в разведении 1:5.
Контрольный овисный и бруцеллезный антигены используют в рабочих титрах.
Комплемент разводят физиологическим раствором 1:20 - :30 в зависимости от титра.
Гемолитическую систему готовят из равных объемов взвеси эритроцитов барана в физиологическом растворе (из осадка эритроцитов, отмытых 2-3 раза центрифугированием с частотой вращения 2500-3000 мин
в течение 10-12 мин) и разведении гемолитической сыворотки в утроенном-учетверенном титре. Определение рабочего титра гемолитической системы для РДСК проводят по табл.4.
При испытании антигена на антикомплементарность вместо сывороток вносят равный объем антигена в том же разведении, а при испытании на гемотоксические свойства физиологическим раствором заменяют комплемент и сыворотку.
Реакцию оценивают по четырехбальной системе в крестах
четыре креста (++++) - гемолиз эритроцитов от 0 до 0%;
три креста (+++) - гемолиз эритроцитов св. 10 до 40%
два креста (++) - гемолиз эритроцитов св. 40 до 70%;
один крест (+) - гемолиз эритроцитов св. 70 до 90%;
отрицательная реакция (-) - гемолиз эритроцитов св. 90 до 100%.
Титром антигена считают наибольшее его разведение, вызывающее полную задержку гемолиза эритроцитов с полиглобулином или референтной овисной сывороткой в разведении 1:10
3. ПРОТОКОЛ ИСПЫТАНИЯ
Для каждой проверенной серии антигена составляют протокол испытания, который должен содержать следующие данные:
наименование штамма;
использованный метод;
результат испытания показателей качества;
дату изготовления;
подпись лица, проводившего испытания;
обозначение настоящего стандарта.