ГОСТ 24230-80 - Корма растительные. Метод определения переваримости in vitro

ГОСТ 24230-80*

Группа С19

ОКП 92 8000

Дата введения 1981-07-01

Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 6 июня 1980 г. N 2627 дата введения установлена 01.07.81

Ограничение срока действия снято Постановлением Госстандарта от 06.06.91 N 816

* ПЕРЕИЗДАНИЕ с Изменением N 1, утвержденным в июне 1986 г. (ИУС 9-86).

Настоящий стандарт распространяется на растительные корма и устанавливает метод определения переваримости сухого вещества кормов in vitro. Метод применяют в агротехнических и селекционных опытах.

Сущность метода заключается в определении степени переваримости (растворения) сухого вещества с помощью ферментов пепсина и целловиридина.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

1. МЕТОД ОТБОРА ПРОБ

1.1. Отбор проб зеленого корма

1.1.1. На участке травостоя выделяют 8-10 учетных площадок размером 1-2 м. Травостой скашивают на высоте 3-5 см. Полученную со всех учетных площадок зеленую массу послойно расстилают на брезенте или полимерной пленке и тщательно перемешивают, получая таким образом объединенную пробу. Для составления средней пробы, масса которой должна быть 1,5-2,0 кг, траву берут порциями по 150-200 г из 10 различных мест. Пробу помещают в пакет из полимерной пленки, куда вкладывают этикетку с указанием адреса и наименования хозяйства, отделения, бригады, номера поля, участка, вида травостоя, фазы вегетации и года урожая. Отобранную пробу сразу же направляют в лабораторию для подготовки к анализу.

1.1.2. От зеленой массы, доставленной на фермы для непосредственного скармливания животным или для приготовления силоса, сенажа, искусственно-обезвоженных кормов, точечные пробы берут вручную или пробоотборником не менее чем из 10 мест порциями по 400-500 г; зеленый корм послойно расстилают на брезенте или полимерной пленке и тщательно перемешивают, получая таким образом объединенную пробу. Среднюю пробу составляют, как указано в п.1.1.1.

1.2. Отбор проб сена - по ГОСТ 4808-87.

1.3. Отбор проб силоса - по ГОСТ 23638-90.

1.4. Отбор проб сенажа - по ГОСТ 23637-90.

1.5. Отбор проб брикетов, гранул и муки из трав - по ГОСТ 13496.0-80.

2. АППАРАТУРА, МАТЕРИАЛЫ И РЕАКТИВЫ

2.1. Для проведения испытания применяют:

мельницу лабораторную марки МГК-2 или других марок, обеспечивающих равномерное, измельчение корма на частицы размером около 1 мм;

весы лабораторные аналитические;

весы технические 2-3-го класса точности;

термостат биологический с температурой нагрева 38-40 °С;

насос водоструйный лабораторный;

шкаф сушильный лабораторный;

центрифугу лабораторную с частотой вращения 2500 мин;

пипетку автоматическую вместимостью 50 см;

пробирки центрифужные вместимостью 100 см;

эксикатор по ГОСТ 25336-82 или аналогичных марок;

штативы для пробирок;

пепсин медицинский;

фермент целлюлазу (целловиридин) марки ГЗх, активностью не менее 75 ед/г;

кислоту соляную по ГОСТ 3118-77, х.ч.;

кислоту лимонную, ос.ч.;

натрий кислый ортофосфорнокислый двузамещенный 12-водный, ос.ч.;

воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

3. ПОДГОТОВКА К ИСПЫТАНИЮ

3.1. Приготовление реактивов

3.1.1. Раствор пепсина, 0,2%-ный: 2 г пепсина растворяют в 1 дм 0,1 М соляной кислоты.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

3.1.2. Раствор лимонной кислоты 0,1 М: 21,008 г лимонной кислоты растворяют в 1 дм дистиллированной воды.

3.1.3. Раствор кислого ортофосфорнокислого натрия 0,2 М: 35,52 г натрия кислого ортофосфорнокислого растворяют в 1 дм дистиллированной воды.

3.1.4. Раствор цитрат-фосфатный буферный с рН 4,6: 10,65 см 0,1 М раствора лимонной кислоты смешивают с 9,35 см 0,2 М раствора натрия кислого ортофосфорнокислого.

3.1.5. Раствор целлюлазы: 5 г целловиридина растворяют в 1 дм цитрат-фосфатного буфера.

3.1.6. Определение активности целлюлозы

Для определения активности целлюлазы готовят стандартный раствор: 5 г целловиридина растворяют в 100 см цитрат-фосфатного буфера, получая таким образом в 1 см раствора 50 мг фермента. В 10 предварительно высушенных до постоянной массы пробирок помещают по 200 мг корма известной переваримости, значение которой определено в опытах in vivo (на животных), приливают в каждую из них соответствующее количество стандартного раствора и цитрат-фосфатного буфера, как указано в таблице.

Номер пробирки	Количество стандартного раствора, см	Количество цитрат-фосфатного буфера, см	Содержание (активность), фермента, мг	Переваримость корма, %
1	1	19	50
2	2	18	100
3	3	17	150
4	4	16	200
5	5	15	250
6	6	14	300
7	7	13	350
8	8	12	400
9	9	11	450
10	10	10	500

Пробирки закрывают пробками, ставят в биологический термостат и выдерживают там в течение 24 ч при температуре 38-40 °С. После этого надосадочную жидкость отсасывают водоструйным насосом, а пробирки с остатками непереваренного корма высушивают в сушильном шкафу при температуре 100-105 °С до постоянной массы. Переваримость (растворимость) сухого вещества корма в каждой пробирке определяют по формуле, приведенной в п.5.1. На основании полученных данных о переваримости корма строят калибровочную кривую. Оптимальной считается та доза фермента, увеличение которой не приводит к дальнейшему (более 5%) повышению переваримости (растворимости) сухого вещества корма.

3.1.5, 3.1.6. (Измененная редакция, Изм. N 1).

3.2. Подготовка пробы для анализа

3.2.1. Сразу после поступления в лабораторию, но не более 4 ч после отбора пробы фиксируют в сушильном шкафу при температуре 80-90 °С в течение 30 мин для прекращения ферментативных процессов в свежескошенных растениях.

3.2.2. 50-100 г корма высушивают в сушильном шкафу при температуре 65 °С до воздушно-сухого состояния и измельчают на лабораторной мельнице до размера частиц 1 мм.

3.2.3. Массовую долю гигроскопической влаги определяют по ГОСТ 23637-90.

4. ПРОВЕДЕНИЕ ИСПЫТАНИЯ

4.1. Навески измельченного воздушно-сухого корма массой около 500 мг, взвешенные с погрешностью не более 0,001 г, помещают в пробирки, предварительно высушенные до постоянной массы, заливают 50 см 0,1 н. раствора солянокислого пепсина, закрывают пробками и выдерживают в биологическом термостате 24 ч при 38-40 °С. После этого надосадочную жидкость удаляют водоструйным насосом и фильтровальной трубкой, промывают дистиллированной водой, центрифугируют в течение 5 мин с частотой вращения 2500 мин и снова удаляют надосадочную жидкость.

Остаток в пробирках заливают 50 см раствора целлюлазы и снова помещают в биологический термостат на 48 ч при 38-40 °С. Периодически (3-4 раза в день) содержимое пробирок встряхивают так, чтобы частицы корма не оставались на стенках пробирок. По окончании второго этапа переваривания надосадочную жидкость удаляют, промывают непереваренный остаток дистиллированной водой, центрифугируют в течение 5 мин с частотой вращения 2500 мин и снова отсасывают надосадочную жидкость водоструйным насосом с фильтровальной трубкой. Пробирки с непереваренными остатками помещают в сушильный шкаф, высушивают при 100-105 °С до постоянной массы и после охлаждения в эксикаторе взвешивают с погрешностью не более 0,001 г.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

4.2. В каждый опыт, кроме испытуемых образцов, включают не менее двух контрольных образцов корма (злакового бобово-злакового и так далее, в зависимости от изучаемого вида растений) с известной (высокой, низкой, промежуточной) переваримостью сухого вещества, определенной методом in vivo.

Данные, полученные in vivo, позволяют рассчитать коэффициенты поправки или уравнение регрессии для перевода данных in vitro в in vivo и сравнивать результаты, полученные в разное время и в разных лабораториях.

(Введен дополнительно, Изм. N 1).

5. ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ

5.1. Переваримость сухого вещества корма in vitro () в процентах вычисляют по формуле

ГОСТ 24230-80 Корма растительные. Метод определения переваримости in vitro (с Изменением N 1) ,

где - масса навески корма, мг;

- масса высушенного непереваренного остатка корма, мг;

- массовая доля гигроскопической влаги в корме, %.

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений.

Допускаемые расхождения между результатами двух параллельных определений не должны превышать 3%.

(Измененная редакция, Изм. N 1).