ГОСТ 20729-75
Группа Р35
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР
ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ
ВОДА МЯСНАЯ (ДЛЯ ВЕТЕРИНАРНЫХ ЦЕЛЕЙ)
Технические условия
Nutrient media. Meat water (for veterinary purposes). Specifications*
______________
* Наименование стандарта. Измененная редакция, Изм. N 1.
Дата введения 1976-01-01
Постановлением Государственного комитета стандартов Совета Министров СССР от 9 апреля 1975 г. N 899 срок действия установлен с 01.01.76 до 01.01.81*
________________
* Ограничение срока действия снято по протоколу N 4-93 Межгосударственного Совета по стандартизации, метрологии и сертификации (ИУС N 4, 1994 год). - Примечание изготовителя базы данных.
ПЕРЕИЗДАНИЕ. Сентябрь 1975 г.
ВНЕСЕНО Изменение N 1, утвержденное и введенное в действие Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 28.06.89 N 2194 с 01.01.90
Изменение N 1 внесено изготовителем базы данных по тексту ИУС N 11, 1989 год
Настоящий стандарт распространяется на мясную воду, представляющую собой экстракт говяжьего или конского мяса и являющуюся основной составной частью питательных сред, предназначенных для выращивания микроорганизмов.
1. ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ
1. ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ
1.1. Мясная вода должна изготавливаться в соответствии с действующими правилами по ведению технологического процесса, утвержденными в установленном порядке.
1.1а. Мясную воду готовят в соотношениях 1 кг мясного фарша в 1 и 2 дм
воды и обозначают соответственно: мясная вода в разведениях 1:1 и 1:2.
(Введен дополнительно, Изм. N 1).
1.2. Мясная вода по физико-химическим и биологическим показателям должна соответствовать требованиям и нормам, указанным в табл.1.
Таблица 1
Наименование показателя | Норма для разведений | |
1:1 | 1:2 | |
Внешний вид | Прозрачная жидкость | |
Цвет | Светло-желтый | |
Запах | Специфический, свежего мясного экстракта | |
Наличие механической примеси, плесени, хлопьев и неразвивающегося осадка | Не допускается | |
Массовая доля общего азота, %, не менее | 0,30 | 0,15 |
Массовая доля азота аминогрупп, аминокислот и низших пептидов, %, не менее | 0,07 | 0,035 |
Массовая доля пептонов, %, не менее | 1,7 | 0,85 |
Массовая доля сухого вещества, %, не менее | 2,4 | 1,2 |
Массовая доля белка, %, не более | 0,45 | 0,23 |
Концентрация водородных ионов (рН) | 5,5-6,8 | 5,5-6,8 |
Стерильность | Посевы на питательные среды не должны давать рост микрофлоры в течение трех суток в термостате при 37-38 °С | |
(Измененная редакция, Изм. N 1).
2. ПРАВИЛА ПРИЕМКИ
2.1. Мясную воду сдают и принимают сериями.
2.2. Каждая серия на предприятиях биологической промышленности Министерства сельского хозяйства СССР должна быть принята государственным контролером Всесоюзного государственного научно-контрольного института ветеринарных препаратов Министерства сельского хозяйства СССР.
2.3. Под серией следует понимать любое количество мясной воды, изготовленное за один технологический цикл, в одной емкости (реакторе) и оформленное одним документом о качестве.
2.4. Для проверки качества препарата от каждой серии мясной воды более 50 дм отбирают 2 дм, при объеме менее 50 дм - 0,6 дм.
Если вся серия мясной воды расфасована в бутыли, делают выборку в количестве одной бутыли. Если мясная вода расфасована во флаконы, составляют выборку такого количества флаконов, чтобы объем мясной воды в отобранных флаконах соответствовал указанной выше норме, которая установлена в зависимости от общего объема серии мясной воды.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
2.5. При получении неудовлетворительных результатов испытаний хотя бы по одному из показателей серию мясной воды считают несоответствующей требованиям настоящего стандарта.
2.6. Контрольную проверку образцов по требованию потребителя проводит Всесоюзный государственный научно-контрольный институт ветеринарных препаратов Министерства сельского хозяйства СССР.
3. МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЙ
3.1. Методы отбора проб
3.1.1. Пробу мясной воды в количестве 2 или 0,6 дм (в зависимости от объема серии препарата) отбирают из реактора или бутыли стерильно.
Пробу объемом 2 дм расфасовывают в 10 флаконов по 200 см. Пять флаконов используют для анализа, а пять - оставляют в архиве государственного контролера.
Пробу, отобранную от серии мясной воды объемом менее 50 дм, в архиве не оставляют.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
3.2. Внешний вид, цвет, наличие механической примеси, плесени, хлопьев и осадка устанавливают, просматривая флаконы и бутыли с мясной водой в проходящем свете, для чего флаконы встряхивают, переворачивают их вниз пробками, а бутыли покачивают.
3.3. Запах мясной воды определяют органолептически.
3.4. Определение содержания общего азота
3.4.1. Аппаратура и реактивы
Для проведения испытания применяют:
весы аналитические;
колбу Кьельдаля вместимостью 50-100 см по ГОСТ 25336-82;
аппарат микро-Кьельдаль;
элемент нагрева (плитку, горелку);
пипетки на 1, 2 и 5 см по ГОСТ 20292-74*;
________________
* На территории Российской Федерации действуют ГОСТ 29169-91, ГОСТ 29227-91-ГОСТ 29229-91, ГОСТ 29251-91-ГОСТ 29253-91, здесь и далее по тексту. - Примечание изготовителя базы данных.
бюретки по ГОСТ 20292-74;
воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72;
кислоту серную по ГОСТ 4204-77, концентрированную и 0,1 н. раствор;
натрия гидрат окиси по ГОСТ 4328-66*, 30-33%-ный и 0,1 н. растворы, приготовленные на предварительно прокипяченной дистиллированной воде;
________________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ 4328-77. - Примечание изготовителя базы данных.
перекись водорода по ГОСТ 10929-64;
________________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ 10929-76. - Примечание изготовителя базы данных.
метиловый красный;
метиленовую синь;
спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962-67*;
________________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 51652-2000. - Примечание изготовителя базы данных.
метиловый оранжевый, 0,1%-ный раствор.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
3.4.2. Проведение испытания
Мясную воду в количестве 1 см помещают в колбу Кьельдаля и прибавляют 2 см концентрированной серной кислоты. В горло колбы вставляют стеклянный грушевидный баллончик или небольшую воронку с запаянным кончиком и минерализуют пробу сначала на слабом огне, затем степень нагрева усиливают, не допуская выбрасывания кипящей смеси в узкую часть колбы. Минерализацию проводят в присутствии катализатора - перекиси водорода. Катализатор добавляют после начала кипения по 0,5 см через каждые 15-20 мин до полного обесцвечивания раствора.
После охлаждения содержимое колбы переносят в колбу для отгона, добавляют 10-12 см дистиллированной воды. Полноту переноса проверяют по индикатору метиловому оранжевому. Последняя порция смывных вод должна остаться желтой.
В приемную колбу аппарата Кьельдаля наливают 20 см 0,1 н. раствора серной кислоты и 2 капли индикатора Таширо. Индикатор Таширо готовят, растворяя 0,4 г метилового красного и 0,2 г метиленовой сини в 200 см 96%-ного этилового спирта.
Отгонную колбу присоединяют к холодильнику и парообразователю. Содержимое отгонной колбы нейтрализуют 30-33%-ным раствором гидрата окиси натрия по индикатору метиловому оранжевому. Отгон производят до тех пор, пока в приемной колбе соберется около 70 см раствора.
Содержимое приемной колбы титруют 0,1 н. раствором гидрата окиси натрия до перехода окраски раствора от лилового к зеленому.
Одновременно ставят контрольный опыт на реактивы, для чего вместо мясной воды в колбу для минерализации берут 1 см дистиллированной воды.
3.4.3. Обработка результатов
Содержание общего азота в мясной воде (
) в процентах вычисляют по формуле
,
где 
- количество 0,1 н. раствора серной кислоты, налитое в приемную колбу, см;
- поправочный коэффициент к титру 0,1 н. серной кислоты;
- количество 0,1 н. раствора гидрата окиси натрия, израсходованное на титрование испытуемой пробы или в контрольном опыте, см;
- поправочный коэффициент к титру 0,1 н. раствора гидрата окиси натрия;
- количество мясной воды, взятое на анализ, см;
0,0014 - количество азота, эквивалентное 1 см 0,1 н. раствора серной кислоты, г.
За окончательный результат испытания принимают разность между средними арифметическими результатами двух параллельных определений в опытных и контрольных пробах. Допускаемые расхождения между результатами параллельных определений не должны превышать ±0,5
3.4.2, 3.4.3. (Измененная редакция, Изм. N 1).
3.5. Определение содержания азота аминогрупп аминокислот и низших пептидов
3.5.1. Аппаратура, материалы и реактивы
Для проведения испытания применяют:
рН-метр;
стаканы лабораторные по ГОСТ 25336-82;
пипетки, бюретки по ГОСТ 20292-74;
формалин технический по ГОСТ 1625-61;
натрия гидрат окиси по ГОСТ 4328-77, 0,1 н. раствор;
фенолфталеин, 1%-ный спиртовой раствор;
воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
3.5.2. Подготовка к испытанию
Непосредственно перед проведением анализа готовят формольную смесь. Для этого к 50 см формалина добавляют 1 см 1%-ного раствора фенолфталеина и 0,1 н. раствором гидрата окиси натрия доводят смесь до слабо-розового цвета.
3.5.3. Проведение испытания
К 2 см прозрачной мясной воды приливают 18 см дистиллированной воды и доводят 0,1 н. раствором гидрата окиси натрия рН смеси до 7,0. Затем приливают 2 см формольной смеси и при постоянном перемешивании потенциометрически титруют 0,1 н. раствором гидрата окиси натрия до рН 9,2.
Одновременно ставят контрольный опыт на реактивы, для чего вместо 2 см мясной воды берут 2 см дистиллированной воды.
3.5.4. Обработка результатов
Содержание азота аминогрупп аминокислот и низших пептидов в мясной воде (
) в процентах вычисляют по формуле
,
где - количество 0,1 н. раствора гидрата окиси натрия, израсходованное на титрование испытуемой пробы, см; - количество 0,1 н. раствора гидрата окиси натрия, израсходованное на титрование в контрольном опыте, см; - поправочный коэффициент к титру 0,1 н. раствора гидрата окиси натрия;
0,0014 - количество азота, соответствующее 1 см 0,1 н. раствора гидрата окиси натрия, г;
2 - количество мясной воды, взятое на анализ, см.
За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Допускаемые расхождения между результатами параллельных определений не должны превышать ±0,2%
3.5.2-3.5.4. (Измененная редакция, Изм. N 1).
3.6. Определение содержания пептонов
3.6.1. Аппаратура, материалы и реактивы
Для проведения испытания применяют:
фотоэлектроколориметр или спектрофотометр;
пипетки по ГОСТ 20292-74;
пробирки по ГОСТ 25336-82;
натрия гидрат окиси по ГОСТ 4328-77, 10%-ный раствор;
медь сернокислую по ГОСТ 4165-78, 2%-ный раствор;
воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72;
центрифуги настольные типа ОПН-8 - 14,2.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
3.6.2. Подготовка к испытанию
3.6.2.1. При построении градуировочного графика по оси абсцисс откладывают концентрацию истинного пептона в процентах, по оси ординат - оптическую плотность (
) согласно данным, приведенным в табл.2.
Таблица 2
Концентрация истинного пептона, % | Оптическая плотность, |
0,50 | 0,550 |
0,25 | 0,280 |
0,17 | 0,190 |
3.6.3. Проведение испытания
В пробирку наливают 10 см мясной воды в разведении 1:10, прибавляют по 1 см 10%-ного раствора гидрата окиси натрия и 2%-ного раствора сернокислой меди. Смесь после добавления каждого реактива хорошо встряхивают.
Одновременно ставят контрольный опыт на реактивы, для чего вместо 10 см разведенной мясной воды берут 10 см дистиллированной воды. Через 2 мин смеси центрифугируют 10 мин с частотой вращения 3000-4000 мин
. Интенсивность окраски измеряют на фотоэлектроколориметре при длинах волн 540-560 нм или на спектрофотометре при 540 нм в кюветах с рабочей длиной 10 мм.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
3.6.4. Обработка результатов
Концентрацию истинного пептона в мясной воде определяют по градуировочному графику.
Оптическая плотность () мясной воды равна разности оптических плотностей в опыте с испытуемой пробой и в контрольном опыте. Полученную по графику концентрацию истинного пептона умножают на 10 (т.е. на разведение мясной воды).
За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Допускаемые расхождения между результатами параллельных определений не должны превышать ±5%.
3.7. Определение содержания сухого вещества
3.7.1. Аппаратура
Для проведения испытания применяют:
весы аналитические;
шкаф сушильный лабораторный;
эксикаторы по ГОСТ 6371-73;
стаканчики для взвешивания (бюксы) по ГОСТ 7148-70;
пипетки по ГОСТ 20292-74.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
3.7.2. Проведение испытания
В предварительно высушенную до постоянной массы бюксу взвешивают с погрешностью не более 0,0002 г мясную воду в количестве 1,0-1,2 г. Затем бюксу с мясной водой высушивают в сушильном шкафу при температуре 100-105 °С до постоянной массы. Высушивание продолжают до тех пор, пока разность между двумя последующими взвешиваниями не будет превышать 0,0002 г.
Примечание. Увеличение массы при одном из взвешиваний в процессе высушивания при расчете не учитывают.
3.7.3. Обработка результатов
Содержание сухого вещества в мясной воде (
) в процентах вычисляют по формуле
,
где 
- масса пустой бюксы с крышкой, г;
- масса бюксы с крышкой и с мясной водой до высушивания, г; 
- масса бюксы с крышкой и с мясной водой после высушивания, г.
За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Допускаемые расхождения между результатами параллельных определений не должны превышать ±0,2%.
3.8. Определение содержания белка (по методу Лоури)
3.8.1. Аппаратура и реактивы
Для проведения испытания применяют:
фотоэлектроколориметр;
пробирки стеклянные по ГОСТ 25336-82;
пипетки по ГОСТ 20292-74;
фильтры бумажные;
натрия гидрат окиси по ГОСТ 4328-77, 0,1 н. раствор;
натрий углекислый по ГОСТ 84-76;
натрий виннокислый или калий виннокислый двузамещенный, 1%-ный раствор;
медь сернокислую по ГОСТ 4165-78;
натрий вольфрамовокислый по ГОСТ 18289-78;
натрий молибденовокислый по ГОСТ 10931-74;
кислоту ортофосфорную 85%-ную;
кислоту соляную по ГОСТ 3118-77;
литий сернокислый;
бром по ГОСТ 4109-79;
воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
3.8.2. Подготовка к испытанию
Приготовление реактива А
Навеску углекислого натрия массой 2 г, взвешенную с погрешностью не более 0,02 г, растворяют в 100 см 0,1 н. раствора гидрата окиси натрия. Если раствор мутный, то перед определением его надо профильтровать.
Приготовление реактива В
Навеску сернокислой меди массой 0,5 г, взвешенную с погрешностью не более 0,02 г, растворяют в 100 см 1%-го раствора двузамещенного виннокислого натрия или калия. Если раствор мутный, то перед определением его надо профильтровать.
Приготовление реактива С
Реактив С готовят непосредственно перед определением смешиванием 50 частей реактива А и 1 части реактива В.
Приготовление реактива Д
Реактив Д (реактив Фолина) готовят в круглодонной на 1 дм колбе из огнеупорного стекла с обратным холодильником.
В колбу помещают 100 г вольфрамовокислого натрия, 25 г молибденовокислого натрия и 700 см дистиллированной воды. После полного растворения солей в колбу добавляют 50 см 85%-ной ортофосфорной кислоты и 100 см концентрированной соляной кислоты. Содержимое колбы осторожно, но хорошо перемешивают. К колбе присоединяют обратный холодильник и смесь кипятят (не слишком сильно) в течение 10 ч. Кипячение молено вести с перерывом, но учитывают лишь период кипения.
После окончания кипячения в смесь добавляют 150 г сернокислого лития, 50 см дистиллированной воды и 5 капель брома (осторожно). Для удаления излишка брома раствор кипятят 15 мин без холодильника под тягой. После охлаждения готовый раствор доводят в мерной колбе до 1 дм, фильтруют через бумажный фильтр и хранят в темной склянке с притертой пробкой в темном месте. Реактив Д должен быть соломенно-желтого цвета без зеленого оттенка. Затем в реактиве определяют концентрацию кислоты.
Для этого приготовленный реактив разводят дистиллированной водой 1:10 (1 см реактива и 9 см воды) и титруют 0,1 н. раствором гидрата окиси натрия по фенолфталеину (3-4 капли). Кислотность рассчитывают делением количества миллилитров 0,1 н. щелочи, израсходованных на титрование 1 см реактива Д, на 10. Реактив Д имеет кислотность 1,6-2,3 н.
Приготовление реактива Е
Реактив Е является реактивом Д, разведенным до 1 н. раствора. Например, если реактив Д является 2,3 н. раствором кислоты, то для приготовления 1 н. раствора Е надо брать 10 см реактива Д и 13 см дистиллированной воды.
Построение градуировочного графика для определения белка
Готовят ряд растворов с определенным содержанием белка нисходящей концентрации от 0,1 до 0,01%, с которыми ставят цветную реакцию по п.3.8.3. Для приготовления растворов можно использовать альбумин, миозин, нативную сыворотку. Содержание белка в растворе определяют по Кьельдалю. Интенсивность окраски измеряют на фотоэлектроколориметре против воды. Из оптической плотности растворов белка вычитают оптическую плотность контроля на реактивы и полученную величину откладывают по оси ординат. По оси абсцисс откладывают концентрацию белка в растворе (в процентах или в миллиграммах). Разведение исследуемого образца для постановки цветной реакции выбирают такое, чтобы основное количество замеров по величине оптической плотности лежало в пределах 0,2-0,8, где точность измерения наиболее высокая.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
3.8.3. Проведение испытания
В пробирку наливают 1 см разведенной (1:10) мясной воды, добавляют 5 см реактива С, перемешивают и через 10 мин добавляют 0,5 см реактива Е. Одновременно ставят контроль на реактивы, для чего вместо мясной воды берут 1 см дистиллированной воды и добавляют те же реактивы, что и в пробирку с мясной водой. Смесь хорошо перемешивают и ставят в темное место на 30-40 мин, интенсивность окраски измеряют на фотоэлектроколориметре с красным фильтром (630-640 нм) против воды в 5-миллиметровых кюветах. Из величины оптической плотности испытуемого образца вычитают величину оптической плотности контроля на реактивы. По полученным значениям оптической плотности растворов с помощью градуировочного графика определяют содержание белка в пробах. При расчете содержания белка в пробе учитывают кратность разведения перед цветной реакцией.
За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Допускаемые расхождения между результатами параллельных определений не должны превышать ±0,05%.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
3.9. Определение концентрации водородных ионов (рН)
3.9.1. Аппаратура и материалы
Для проведения испытания применяют:
рН-метр;
стаканы лабораторные по ГОСТ 25336-82;
воронки стеклянные;
фильтры бумажные.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
3.9.2. Проведение испытания
Мясную воду фильтруют через бумажный фильтр и в прозрачном фильтрате определяют рН по инструкции, приложенной к рН-метру.
3.10. Определение стерильности
3.10.1. Аппаратура, материалы и реактивы
Для проведения испытания применяют:
термостат с температурой нагрева 37-38 °С;
автоклав;
флаконы вместимостью 200 см;
пипетки по ГОСТ 20292-74;
пробирки стеклянные по ГОСТ 25336-82;
воронки стеклянные;
пробирки ватномарлевые;
пептон сухой ферментативный по ГОСТ 13805-76;
агар микробиологический по ГОСТ 17206-84*.
_______________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ 17206-96. - Примечание изготовителя базы данных.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
3.10.2. Подготовка к испытанию
Готовят в соответствии с действующей рецептурой мясопептонный бульон (МПБ), мясопептонный агар (МПА) и мясопептопный-печеночный бульон (МППБ) под маслом (среда Китт-Тароцци). Среды разливают по 8-10 см в пробирки, закрывают ватными пробками, обернутыми марлей и пергаментными колпачками, и стерилизуют в автоклаве в течение 30 мин при 1,5 кгс/см
.
3.10.3. Проведение испытания
Мясную воду (всю серию) в реакторе или в бутылях выдерживают в течение трех дней при комнатной температуре.
Взятую стерильно пробу мясной воды расфасовывают по 100 см в четыре флакона вместимостью 200 см. Затем мясную воду в количестве 0,2 см вводят в пробирки с МПБ, МПА и МППБ. Посевы производят в 6-8 пробирок с каждой средой. Пробирки и флаконы выдерживают в течение трех дней в термостате при 37-38 °С. Среды в пробирках и мясная вода во флаконах должны оставаться стерильными.
3.10.2, 3.10.3. (Измененная редакция, Изм. N 1).
3.10.4. Обработка результатов
При наличии роста микрофлоры в реакторе или бутылях серия мясной воды бракуется. При наличии роста микрофлоры во всех флаконах и пробирках серия мясной воды также бракуется. При наличии роста микрофлоры в одном флаконе или в одной-двух пробирках контроль на стерильность повторяют на удвоенном количестве флаконов и пробирок. При повторном росте микрофлоры серию мясной воды бракуют.
4. РАСФАСОВКА, УПАКОВКА, МАРКИРОВКА, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ
4.1. Мясную воду стерильно расфасовывают в стеклянные бутыли (баллоны) вместимостью 10±0,5 и 20±1 дм. Допускается более мелкая расфасовка - флаконы вместимостью 200 и 500 см.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
4.2. Бутыли закрывают стерильными резиновыми пробками по ГОСТ 7852-65, которые сверху завязывают пергаментной бумагой. Флаконы закрывают резиновыми пробками и закатывают алюминиевыми колпачками.
4.3. На бутыли и флаконы наклеивают бумажные этикетки с указанием:
наименования препарата;
количества в дм;
номера серии;
даты изготовления;
срока годности;
условий хранения;
обозначения настоящего стандарта.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
4.4. Мясную воду хранят в реакторе или в бутылях в чистом, сухом и темном помещении при температуре 4-10 °С.
4.5. Мясную воду транспортируют всеми видами транспорта при соблюдении условий хранения, указанных в п.4.4.
Допускается транспортирование при более высокой температуре, но не выше 18 °C, при этом срок транспортирования должен быть не более пяти суток.
4.6. Срок годности мясной воды 6 месяцев со дня изготовления. По истечении указанного срока мясную воду подвергают испытанию и в случае соответствия требованиям, установленным настоящим стандартом, срок годности может быть продлен еще на 3 месяца.
Замена
ГОСТ 6371-73 введен взамен ГОСТ 6371-64.
ГОСТ 10394-72 введен взамен ГОСТ 10394-63.
ГОСТ 10515-75 введен взамен ГОСТ 10515-63.
ГОСТ 10931-74 введен взамен ГОСТ 10931-64.