ГОСТ 17405-81
Антиген сапной для реакции связывания комплемента. Технические условия

ГОСТ 17405-81

Группа Р31

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР

     
     
АНТИГЕН САПНОЙ ДЛЯ РЕАКЦИИ СВЯЗЫВАНИЯ КОМПЛЕМЕНТА

     
Технические условия

     
Qlanders antigen for use in the complement fixation test. Specifications

ОКП 93 8863

Дата введения 1983-01-01

РАЗРАБОТАН Министерством сельского хозяйства СССР

ИСПОЛНИТЕЛИ

А.Н.Шаров, Н.К.Букова, Н.Д.Насокина, А.А.Гринев, А.Н.Косякин

ВНЕСЕН Министерством сельского хозяйства СССР

Член Коллегии А.Д.Третьяков

УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 31 декабря 1981 г. N 5971

Срок введения установлен с 01.01.1983 г. до 01.01.1988 г.*
________________
* Ограничение срока действия снято постановлением Госстандарта России от 30.06.92 N 620 (ИУС N 9-92). - Примечание изготовителя базы данных.

ВЗАМЕН ГОСТ 17405-72


ВНЕСЕНО Изменение N 1, утвержденное и введенное в действие Постановлением Госстандарта СССР от 27.05.1987 N 1711 c 01.10.1987

Изменение N 1 внесено изготовителем базы данных по тексту ИУС N 8, 1987 год


Настоящий стандарт распространяется на сапной антиген, представляющий собой экстракт убитых сапных бактерий, предназначенный для реакции связывания комплемента (РСК) при диагностике сапа.

1. ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ

1. ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ

1.1. Сапной антиген должен изготовляться в соответствии с требованиями настоящего стандарта по технологическим правилам, утвержденным в установленном порядке.

1.2. По физическим и биологическим свойствам сапной антиген должен соответствовать требованиям и нормам, указанным в табл.1.

Таблица 1

Наименование показателя	Характеристика и норма
Внешний вид	Прозрачная, слегка опалесцирующая жидкость светло-желтого цвета без осадка и механических примесей
Стерильность	Посевы на питательные среды должны быть стерильными
Активность (титр)	1:100-1:200
Разрешающая способность единицы активности референс-препарата (ЕАрп)	0,6±0,2
Специфичность	В смеси с сапной сывороткой должен вызывать задержку гемолиза эритроцитов в РСК и не вызывать ее в смеси с негативной сывороткой
Отсутствие антикомплементарных свойств	Без сапной сыворотки не должен вызывать задержки гемолиза эритроцитов
Отсутствие гемолитических свойств	Без сапной сыворотки и комплемента не должен вызывать гемолиза эритроцитов

Таблица 1 (Измененная редакция, Изм. N 1).

2. ПРАВИЛА ПРИЕМКИ

2.1. Сапной антиген принимают сериями.

Под серией следует понимать любое количество сапного антигена, полученное за один технологический цикл, в одной емкости. Серия должна иметь свой номер, номер государственного контроля и оформлена одним документом о качестве.

2.2. Каждая серия сапного антигена должна быть принята на предприятии-изготовителе государственным контролем Всесоюзного государственного научно-контрольного института ветеринарных препаратов Госагропрома СССР.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.3. Внешний вид сапного антигена определяют по каждой ампуле всей серии препарата.

2.4. Для контроля качества сапного антигена от каждой серии отбирают 40 ампул препарата.

2.5. При получении неудовлетворительных результатов испытаний хотя бы по одному из показателей по нему проводят повторные испытания удвоенного количества ампул с препаратом.

Результаты повторных испытаний распространяются на всю серию.

2.6. Контроль качества препарата по требованию потребителя проводит государственный контролер или Всесоюзный государственный научно-контрольный институт ветеринарных препаратов Госагропрома СССР.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

3. МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЙ

3.1. Метод отбора проб

3.1.1. Ампулы отбирают из разных мест нескольких упаковочных единиц. 20 ампул используют для испытаний, а 20 оставляют в архиве государственного контролера на 3 года.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

3.2. Для определения внешнего вида, отсутствия осадка и примесей ампулы с сапным антигеном встряхивают и просматривают в проходящем свете.

3.3. Определение стерильности

3.3.1. Аппаратура, материалы и реактивы

Термостат с температурой нагрева 37-38°С.

Автоклав.

Пипетки пастеровские.

Пробирки стеклянные по ГОСТ 25336-82.

Воронки стеклянные по ГОСТ 25336-82.

Пробки ватно-марлевые.

Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026-76.

Пептон сухой ферментативный по ГОСТ 13805-76.

Агар микробиологический по ГОСТ 17206-84* или агар пищевой по ГОСТ 16280-70**.
________________
* На территории Российской Федерации документ не действует. Действует ГОСТ 17206-96;
** На территории Российской Федерации документ не действует. Действует ГОСТ 16280-2002. - Примечание изготовителя базы данных.

Глицерин по ГОСТ 6259-75.

Масло вазелиновое по ГОСТ 3164-78.

Глюкоза кристаллическая гидратная по ГОСТ 975-75*.
________________
* На территории Российской Федерации документ не действует. Действует ГОСТ 975-88. - Примечание изготовителя базы данных.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709-72.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

3.3.2. Подготовка к испытанию

В соответствии с действующей рецептурой готовят мясопептонный агар (МПА), МПА с 2-4% глицерина, мясопептонный бульон (МПБ) по ГОСТ 20730-75, мясопептонный печеночный бульон (МППБ) под вазелиновым маслом (среда Китт-Тароцци) и среду Сабуро. Среды разливают по 8-10 см (МПА и среду Сабуро - по 5-6 см) в пробирки, закрывают ватно-марлевыми пробками и стерилизуют в автоклаве при давлении 0,15 МПа в течение 30 мин. Плотные питательные среды перед применением скашивают.

3.3.3. Проведение испытания

Проводят высев по 0,2-0,3 см из смеси содержимого пяти ампул сапного антигена на МПБ, МПА, МПА с 2-4% глицерина, МППБ под вазелиновым маслом и среду Сабуро - по 3 пробирки каждой среды.

3.3.4. Обработка результатов

Посевы должны оставаться стерильными при выдерживании их в термостате в течение 10 сут при температуре 37-38°С, а на среде Сабуро - при 20-22°С.

3.4. Определение активности (титра), специфичности, разрешающей способности, отсутствия антикомплементарных и гемолитических свойств антигена

(Измененная редакция, Изм. N 1).

3.4.1. Аппаратура и реактивы

Холодильник бытовой.

Баня водяная с терморегулятором.

Центрифуга на 3 тыс. об/мин.

Пипетки пастеровские.

Пипетки мерные по ГОСТ 20292-74, вместимостью 1, 2, 5, 10 см.

Пробирки стеклянные по ГОСТ 25336-82.

Цилиндры мерные по ГОСТ 1770-74.

Колбы стеклянные по ГОСТ 1770-74.

Штативы для пробирок.

Потенциометр ЭВ-74 или прибор того же класса точности.

Натрий хлористый по ГОСТ 4233-77.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709-72.

Комплемент по ГОСТ 16446-78.

Гемолизин по ГОСТ 16445-78.

Сыворотка лошадей неспецифическая (негативная).

Эритроциты барана.

Антиген сапной контрольный.

Референс-препарат сапной сыворотки с установленной активностью.

Примечания:

1. Под контрольной серией сапного антигена понимают серию, апробированную для этой цели Всесоюзным государственным научно-контрольным институтом ветеринарных препаратов Госагропрома СССР и используемую в течение срока ее годности.

2. Под референс-препаратом сапной сыворотки понимают апробированную Всесоюзным государственным научно-контрольным институтом ветеринарных препаратов Госагропрома СССР серию сапной сыворотки или полиглобулин, выделенный из этой сыворотки, с установленной биологической активностью по содержанию единиц активности (ЕАрп), используемую в пределах установленного срока годности.


(Измененная редакция, Изм. N 1).

3.4.2. Подготовка к испытанию

3.4.2.1. Готовят физиологический раствор рН 6,8-7,2.

3.4.2.2. Готовят последовательным разведением раствора референс-препарата сапной сыворотки с содержанием в 1 см 12,8; 6,4; 3,2; 1,6; 0,8; 0,4 ЕА и разведение негативной сыворотки 1:5 и инактивируют при температуре 58-59°С в течение 30 мин.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

3.4.2.3. Готовят разведения на физиологическом растворе испытуемого антигена 1:50, 1:100, 1:200, 1:300, 1:400 и контрольной серии антигена 1:100.

3.4.2.4. В соответствии с требованиями ГОСТ 16446-78 на комплемент готовят гемолитическую систему, состоящую из равных объемов 2,5%-ной взвеси эритроцитов и раствора гемолизина в рабочем разведении. Полученную гемсистему помещают в водяную баню при 37°С на 20 мин для сенсибилизации эритроцитов.

3.4.2.5. Устанавливают титр комплемента в соответствии с требованиями ГОСТ 16446-78.

Для применения в реакции комплемент берут в количестве на два интервала большем его титра. Так, например, при титре комплемента 0,19 его рабочая доза будет 0,25.

Затем готовят 40 см комплемента в рабочей дозе, для чего наливают в колбу нативный комплемент в объеме, равном показателю его рабочей дозы, умноженному на 4 (в примере - 1,00 см) и добавляют физиологический раствор до общего объема жидкости 40 см.

3.4.3. Проведение испытания

Разведения антигена, сывороток и комплемент разливают в указанной последовательности по 0,5 см в пробирки и одновременно ставят контрольные пробирки в соответствии с требованиями табл.2. В контрольные пробирки вместо недостающих компонентов вносят по 0,5 см физиологического раствора.

Таблица 2

Схема и результаты постановки РСК (пример)

Доза референс-препарата сапной сыворотки, ЕАрп		Степень задержки гемолиза эритроцитов при разведении испытуемой серии антигена, %				Контроль
		1:50	1:100	1:200	1:400	Контрольная серия антигена 1:100	Без антигена	Без антигена и комплемента
6,4		0	0	0	0	0	100	0
3,2		0	0	0	10	0	100	0
1,6		0	0	0	30	0	100	0
0,8		20	0	0	60	0	100	0
0,4		60	40	30	90	40	100	0
0,2		100	90	90	100	100	100	0
Контроль	Негативная сыворотка 1:5	100	100	100	100	100	100	0
	Без сыворотки	100	100	100	100	100	100	0
	Без сыворотки и комплемента	0	0	0	0	0	0	0

Таблица 2 (Измененная редакция, Изм. N 1).

Штативы с пробирками встряхивают и помещают в водяную баню при 37°С на 20 мин. Затем в каждую пробирку вносят гемолитическую систему в объеме 1 см и снова помещают в баню на 20 мин.

После бани штатив с пробирками выдерживают при 4-12°С в течение 15-18 ч.

3.4.4. Обработка результатов

Реакцию оценивают по степени гемолиза эритроцитов в процентах по шкале гемолиза. Для приготовления шкалы гемолиза из реакции отбирают 5 пробирок с полным гемолизом эритроцитов (100%) и содержимое их сливают вместе. Затем смесь разливают в пробирки в количестве, указанном в табл.3.

Таблица 3

Схема составления шкалы гемолиза

Номер пробирки	Компоненты, см		Процент гемолиза
	гемолизированные эритроциты	физиологический раствор
1	0,0	2,0	0
2	0,2	1,8	10
3	0,4	1,6	20
4	0,6	1,4	30
5	0,8	1,2	40
6	1,0	1,0	50
7	1,2	0,8	60
8	1,4	0,6	70
9	1,6	0,4	80
10	1,8	0,2	90
11	2,0	0,0	100

Титром антигена считают наибольшее его разведение, при котором наблюдается полная задержка гемолиза эритроцитов с наибольшим количеством разведения референс-препарата сапной сыворотки. Титр антигена должен быть 1:100-1:200.

Разрешающей способностью антигена считают способность его в разведении 1:100 выявлять минимальное количество единиц активности референс-препарата сапной сыворотки при 0-10%-ном гемолизе эритроцитов. Разрешающая способность испытуемой серии антигена, как и контрольной серии, должна быть равна (0,6±0,2) ЕАрп.

Антиген считают специфичным, не обладающим антикомплементарными и гемолитическими свойствами, если в контрольных пробирках с негативной сывороткой и без сапной сыворотки эритроциты полностью гемолизируются (100% гемолиза), а в контрольных пробирках без сапной сыворотки и комплемента наступает полная задержка гемолиза эритроцитов (отсутствие гемолиза).

(Измененная редакция, Изм. N 1).

4. УПАКОВКА, МАРКИРОВКА, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ

4.1. Сапной антиген должен фасоваться в стерильные ампулы вместимостью 1 см. Ампулы должны быть запаяны.

4.2. На ампулах должны быть следующие обозначения:

сокращенное наименование препарата - "сапантиген";

количество препарата, см;

номер серии.

4.3. По 10 ампул с сапным антигеном должно быть упаковано в картонные коробки с разделительными перегородками. На каждой коробке должна быть этикетка, на которой указывают:

наименование и товарный знак предприятия-изготовителя;

наименование препарата;

количество ампул;

количество препарата в ампуле, см;

номер серии;

номер госконтроля;

дату изготовления;

срок годности;

"Рабочее разведение 1:100";

условия хранения;

номер браковщика;

обозначение настоящего стандарта.

4.4. Коробки с ампулами сапного антигена упаковывают в деревянные или фанерные ящики массой брутто не более 15 кг. Внутрь каждого ящика вкладывают контрольный лист с указанием:

наименования препарата;

наименования предприятия-изготовителя и его товарного знака;

количества коробок в ящике;

номера серии;

даты упаковки;

фамилии или номера упаковщика.

4.5. Маркировку грузов проводят по ГОСТ 14192-77 с указанием следующих данных:

наименования предприятия-изготовителя и его товарного знака;

наименования потребителя и его адреса;

наименования препарата;

количества ампул в ящике;

номера серии препарата;

срока годности;

массы брутто;

условий хранения и транспортирования;

даты изготовления;

обозначения настоящего стандарта;

предупредительной надписи: "Биопрепараты" и манипуляционных знаков "Осторожно, хрупкое", "Боится нагрева", "Боится сырости", "Боится мороза", "Верх, не кантовать".

4.6. Сапной антиген транспортируют всеми видами транспорта при температуре 2-8°С с соблюдением правил перевозки грузов, действующих на данном виде транспорта. Допускается транспортировать сапной антиген при более высокой температуре, но не выше 25°С, при этом срок транспортирования должен быть не более 10 сут.

4.7. Сапной антиген хранят в сухом темном помещении при температуре 2-8°С.

5. ГАРАНТИИ ИЗГОТОВИТЕЛЯ

5.1. Изготовитель гарантирует соответствие выпускаемого сапного антигена требованиям настоящего стандарта при соблюдении условий применения, хранения и транспортирования.

5.2. Гарантийный срок хранения антигена - 2 года со дня его изготовления.