ГОСТ 13496.22-90
Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения цистина и метионина

ГОСТ 13496.22-90

Группа С19

     
     
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

КОРМА, КОМБИКОРМА, КОМБИКОРМОВОЕ СЫРЬЕ

Метод определения цистина и метионина

Fodder, mixed fodder and mixed fodder raw materials. Method for determination of cistinum and metioninum



МКС 65.120
ОКСТУ 9209

Дата введения 1992-01-01

     
     
ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ

1. РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН ВПНО "Союзсельхозхимия"

2. УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по управлению качеством продукции и стандартам от 05.12.90 N 3052

3. ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

4. ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ

Обозначение НТД, на который дана ссылка

Номер раздела

ГОСТ 1770-74

2

ГОСТ 3118-77

2

ГОСТ 4328-77

2

ГОСТ 5848-73

2

ГОСТ 6709-72

2

ГОСТ 9147-80

2

ГОСТ 10929-76

2

ГОСТ 12026-76

2

ГОСТ 13496.0-80

1

ГОСТ 13586.3-83

1

ГОСТ 13979.0-86

1

ГОСТ 17681-82

1

ГОСТ 14106-80

2

ГОСТ 21400-75

2

ГОСТ 22280-76

2

ГОСТ 24104-88

2

ГОСТ 25336-82

2

ГОСТ 27262-87

1

ГОСТ 29227-91

2


5. Ограничение срока действия снято по протоколу N 2-92 Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации (ИУС 2-93)

6. ПЕРЕИЗДАНИЕ. Март 2011 г.


Настоящий стандарт распространяется на все виды кормов, комбикормов и комбикормовое сырье и устанавливает метод определения цистина и метионина.

Метод основан на окислении цистина и метионина смесью перекиси водорода с муравьиной кислотой до цистеиновой кислоты и метионинсульфона и последующем их разделении на ионообменной хроматографической колонке после гидролиза соляной кислотой концентрации ГОСТ 13496.22-90 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения цистина и метионина (ГОСТ 13496.22-90 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения цистина и метионина)=6 моль/дмГОСТ 13496.22-90 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения цистина и метионина. Интенсивность окрашенного комплекса при реакции с нингидриновым реактивом пропорциональна содержанию аминокислоты в растворе.

Стандарт применяют в научно-исследовательских учреждениях, лабораториях агрохимической службы, республиканских и зональных лабораториях комбикормовой промышленности.

1. ОТБОР ПРОБ

1. ОТБОР ПРОБ


Отбор проб - по ГОСТ 13496.0, ГОСТ 13586.3, ГОСТ 13979.0, ГОСТ 17681, ГОСТ 27262.

2. АППАРАТУРА


Измельчитель проб растений ИПР-2 или соломорезка марки ИСР-1.

Сушилка проб кормов СК-2 или шкаф сушильный лабораторный с погрешностью поддержания температуры не более 5 °С.

Шкаф сушильный типа СЭШ-ЗМ или аналогичный с рабочей температурой 110 °С, максимальным перепадом температуры 2 °С и периодическим колебанием температур в рабочей зоне не более 0,5 °С.

Мельница лабораторная МРП-2.

Сито с круглыми отверстиями диаметром 1 мм.

Весы лабораторные 2-го и 3-го классов точности с пределом взвешивания 200 и 500 г по ГОСТ 24104*.
________________
* С 1 июля 2002 г. введен в действие ГОСТ 24104-2001. На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 53228-2008.


Автоклав по ГОСТ 14106.

Термоблок многопозиционный для гидролиза кормов ТМ-1.

Автоанализатор аминокислот.

Устройство для выпаривания гидролизатов УВГ-1 или баня водяная.

рН-метр.

Дозатор стеклянный вместимостью 10 смГОСТ 13496.22-90 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения цистина и метионина.

Ампулы стеклянные с перетяжкой вместимостью 20 смГОСТ 13496.22-90 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения цистина и метионина по ГОСТ 21400.

Колбы мерные вместимостью 50, 100, 1000 смГОСТ 13496.22-90 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения цистина и метионина по ГОСТ 1770.

Пробирки стеклянные вместимостью 20 смГОСТ 13496.22-90 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения цистина и метионина по ГОСТ 1770.

Пипетки градуированные вместимостью 1, 2, 5, 10 смГОСТ 13496.22-90 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения цистина и метионина по ГОСТ 29227.

Воронки стеклянные диаметром 2-3 см по ГОСТ 25336.

Чашки фарфоровые по ГОСТ 9147.

Бюксы стеклянные диаметром не менее 5 см по ГОСТ 25336.

Палочки стеклянные оплавленные.

Набор реактивов к автоанализатору.

Стандартные растворы аминокислот.

Кислота соляная концентрированная по ГОСТ 3118, х. ч.

Раствор соляной кислоты концентрации ГОСТ 13496.22-90 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения цистина и метионина (ГОСТ 13496.22-90 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения цистина и метионина)=6 моль/дмГОСТ 13496.22-90 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения цистина и метионина; готовят смешиванием равных объемов концентрированной соляной кислоты и дистиллированной воды.

Натрий лимоннокислый трехзамещенный по ГОСТ 22280, х. ч. или ч. д. а.

Фенол.

Натрия гидроокись по ГОСТ 4328, х. ч., раствор с массовой долей 50%.

Кислота муравьиная по ГОСТ 5848, ч. д. а.

Водорода перекись по ГОСТ 10929.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709 двойного перегона.

Фильтры беззольные с синей полосой по ГОСТ 12026.

Допускается использовать аппаратуру, мерную посуду и другие средства измерений, имеющие такие же или лучшие метрологические характеристики.

3. ПОДГОТОВКА К ИСПЫТАНИЮ

3.1. Подготовка проб

Среднюю пробу сена, сенажа, зеленой массы измельчают на отрезки длиной 1-3 см. Корнеплоды разрезают на пластинки (ломтики) толщиной до 0,8 см. Методом квартования выделяют часть средней пробы, масса которой после высушивания должна быть не менее 100 г. Высушивание проб проводят в сушильном шкафу при температуре 60-65 °С до воздушно-сухого состояния. После высушивания пробу размалывают на мельнице и просеивают через сито. Остаток на сите дополнительно измельчают, добавляют к просеянной части и тщательно перемешивают.

Средние пробы комбикормов, зерна, жмыхов, шротов, гранул травяной муки или витаминной из древесной зелени размалывают без предварительного подсушивания и просеивают через сито. Корма с содержанием жира более 10% предварительно обезжиривают.

Подготовленные пробы хранят в стеклянной или пластмассовой банке с крышкой в сухом темном месте не более двух лет.

3.2. Приготовление окислительной смеси

Окислительную смесь готовят смешиванием перекиси водорода и муравьиной кислоты в отношении 1:9; готовят в день проведения испытания.

3.3. Приготовление буферного раствора (2,20±0,02) ед. рН

19,6 г лимоннокислого трехзамещенного натрия растворяют в 200-300 смГОСТ 13496.22-90 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения цистина и метионина дистиллированной воды, приливают 16,6 смГОСТ 13496.22-90 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения цистина и метионина концентрированной соляной кислоты, 1 смГОСТ 13496.22-90 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения цистина и метионина фенола и доводят объем до 1 дмГОСТ 13496.22-90 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения цистина и метионина в мерной колбе дистиллированной водой. Концентрацию водородных ионов контролируют на рH-метре и при необходимости корректируют раствором гидроокиси натрия с массовой долей 50% или концентрированной соляной кислотой.

3.4. Приготовление стандартного раствора аминокислот

Готовят из основного раствора, содержащего 187 мг цистеиновой кислоты и 181 мг метионинсульфона в 100 смГОСТ 13496.22-90 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения цистина и метионина раствора соляной кислоты концентрации ГОСТ 13496.22-90 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения цистина и метионина (ГОСТ 13496.22-90 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения цистина и метионина)=0,1 моль/дмГОСТ 13496.22-90 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения цистина и метионина.

Стандартный раствор аминокислот готовят разведением 25 смГОСТ 13496.22-90 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения цистина и метионина основного раствора в 100 смГОСТ 13496.22-90 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения цистина и метионина раствора соляной кислоты концентрации ГОСТ 13496.22-90 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения цистина и метионина (ГОСТ 13496.22-90 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения цистина и метионина)=0,1 моль/дмГОСТ 13496.22-90 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения цистина и метионина. 1 смГОСТ 13496.22-90 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения цистина и метионина такого раствора содержит 0,47 мг цистеиновой кислоты и 0,45 кг метионинсульфона, что соответствует 2,5 мкмоль каждой кислоты в стандартном растворе, прилагаемом к автоанализаторам. Стандартный раствор хранят в герметично закрытых флаконах в холодильнике в течение нескольких лет.

Рабочий раствор аминокислот готовят разведением стандартного раствора аминокислот в буфере 2,20 ед. рН до концентрации, рекомендуемой для конкретного типа аминокислотного анализатора.

4. ПРОВЕДЕНИЕ ИСПЫТАНИЯ


Навеску воздушно-сухого корма массой (100,0±0,1) мг помещают в чашку устройства для выпаривания гидролизатов УВГ-1 (или фарфоровую чашку при выпаривании на водяной бане), приливают 5 смГОСТ 13496.22-90 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения цистина и метионина свежеприготовленной окислительной смеси и выпаривают при постоянном помешивании при температуре 60 °С. Сухой остаток количественно переносят в ампулу термоблока ТМ-1 или в пробирку с перетяжкой, используя 10 смГОСТ 13496.22-90 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения цистина и метионина раствора соляной кислоты концентрации ГОСТ 13496.22-90 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения цистина и метионина (ГОСТ 13496.22-90 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения цистина и метионина)=6 моль/дмГОСТ 13496.22-90 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения цистина и метионина. Ампулу термоблока герметично закрывают тефлоновой крышкой и устанавливают в термоблок для гидролизата при температуре 110 °С. На блоке управления включают тумблер "Перемешивание" и устанавливают время гидролиза 4 ч.

При гидролизе в термостате ампулу запаивают в пламени газовой горелки в месте перетяжки и помещают в предварительно нагретый до температуры 110 °С сушильный шкаф на 16 ч.

При гидролизе в автоклаве содержимое количественно переносят в пробирки вместимостью 20 смГОСТ 13496.22-90 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения цистина и метионина, закрывают стеклянными колпачками или воронками для предотвращения разбрызгивания кислоты во время гидролиза и устанавливают в автоклав. Гидролиз проводят при температуре 137 °С и давлении 0,25 МПа в течение 3 ч.

После завершения гидролиза гидролизаты охлаждают до комнатной температуры, перемешивают и содержимое фильтруют через беззольный фильтр (первую порцию фильтрата для анализа не используют). 1-2 смГОСТ 13496.22-90 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения цистина и метионина фильтрата выпаривают досуха на УВГ-1 или водяной бане и осадок растворяют в 10 смГОСТ 13496.22-90 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения цистина и метионина буферного раствора 2,20 ед. рН. Раствор гидролизата хранят в течение месяца в холодильнике в герметично закрытых пробирках.

Испытуемый гидролизат пробы вводят автоматически или при помощи шприца в верхнюю часть колонки анализатора аминокислот. Для идентификации аминокислот и их количественного определения на колонку наносят стандартный раствор аминокислот. Порядок работы на аминоанализаторах регламентируется прилагаемой инструкцией.

5. ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ


Содержание аминокислот рассчитывают по соотношению площадей пиков на хроматограмме соответствующих кислот в стандартном растворе и гидролизатах испытуемых проб.

5.1. Массу аминокислоты (ГОСТ 13496.22-90 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения цистина и метионина) в граммах на 1 кг воздушно-сухого вещества корма вычисляют по формуле

ГОСТ 13496.22-90 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения цистина и метионина,


где ГОСТ 13496.22-90 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения цистина и метионина - концентрация стандартного рабочего раствора, мг/смГОСТ 13496.22-90 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения цистина и метионина;

ГОСТ 13496.22-90 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения цистина и метионина - интегрируемая величина площади пика аминокислоты испытуемой пробы;

ГОСТ 13496.22-90 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения цистина и метионина - объем гидролизата, смГОСТ 13496.22-90 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения цистина и метионина;

ГОСТ 13496.22-90 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения цистина и метионина - интегрируемая величина площади пика аминокислоты стандартного рабочего раствора;

ГОСТ 13496.22-90 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения цистина и метионина - масса навески пробы, мг.

Полученный результат корректируют с учетом разведения гидролизата и потери массы навески корма после обезжиривания.

Для пересчета цистеиновой кислоты и метионинсульфона в цистин и метионин используют переводные коэффициенты 0,710 и 0,023 соответственно.

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Результаты вычисляют до третьего десятичного знака и округляют до второго десятичного знака. Допускаемые расхождения между результатами двух параллельных определений (ГОСТ 13496.22-90 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения цистина и метионина) при доверительной вероятности ГОСТ 13496.22-90 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения цистина и метионина=0,95 не должны превышать значений:

для цистеина ГОСТ 13496.22-90 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения цистина и метионина;

для метионина ГОСТ 13496.22-90 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения цистина и метионина,

где ГОСТ 13496.22-90 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения цистина и метионина- среднее арифметическое результатов двух параллельных определений.

Допускается проведение анализа без параллельных определений при наличии в партии испытуемых проб стандартных образцов (СО). В этом случае за результат испытания принимают результат единичного определения, если разница между воспроизведенным и аттестованным значением содержания аминокислоты находится в пределах погрешности анализа.

5.2. Массу аминокислоты (ГОСТ 13496.22-90 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения цистина и метионина) в граммах на 1 кг сухого вещества корма вычисляют по формуле

ГОСТ 13496.22-90 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения цистина и метионина,


где ГОСТ 13496.22-90 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения цистина и метионина - масса аминокислоты в испытуемой пробе воздушно-сухого корма, г/кг;

ГОСТ 13496.22-90 Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения цистина и метионина - влажность испытуемой пробы, %.



Copyright © 2024