ГОСТ Р 51939-2002
Молоко. Метод определения лактулозы

ГОСТ Р 51939-2002

Группа Н19

     
     
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

     
     
МОЛОКО

Метод определения лактулозы

Milk. Method for determination of lactulose content



ОКС 67.100.10
ОКСТУ 9209

Дата введения 2003-10-01

     
     
Предисловие

1 РАЗРАБОТАН Московским государственным университетом пищевых производств

ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 335 "Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность"

2 ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 25 сентября 2002 года N 347-ст

3 Настоящий стандарт за исключением разделов 2, 6, 7 и пунктов 3.2, 5.1-5.10, 5 и 6, 8.8.1-8.8.3 представляет собой аутентичный текст национального стандарта ФРГ ДИН 10461-90 "Молоко. Определение лактулозы"

4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

5 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Август 2009 г.

1 Область применения

     1 Область применения


Настоящий стандарт распространяется на молоко и устанавливает метод определения лактулозы. Стандарт применяется для идентификации пастеризованного, стерилизованного молока, молока, полученного ультравысокотемпературной (УВТ) обработкой.

2 Нормативные ссылки


В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 245-76 Натрий фосфорнокислый однозамещенный 2-водный. Технические условия

ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 3652-69 Реактивы. Кислота лимонная моногидрат и безводная. Технические условия

ГОСТ 3769-78 Реактивы. Аммоний сернокислый. Технические условия

ГОСТ 4172-76 Реактивы. Натрий фосфорнокислый двузамещенный 12-водный. Технические условия

ГОСТ 4174-77 Реактивы. Цинк сернокислый 7-водный. Технические условия

ГОСТ 4201-79 Реактивы. Натрий углекислый кислый. Технические условия

ГОСТ 4207-75 Реактивы. Калий железистосинеродистый 3-водный. Технические условия

ГОСТ 4328-77 Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия

ГОСТ 4523-77 Реактивы. Магний сернокислый 7-водный. Технические условия

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 10929-76 Реактивы. Водорода пероксид. Технические условия

ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия

ГОСТ 24104-88* Весы лабораторные общего назначения и образцовые. Общие технические условия
_______________
* С 1 июля 2002 г. введен в действие ГОСТ 24104-2001.


ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 26809-86 Молоко и молочные продукты. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования.

3 Определение, обозначения и сокращения

3.1 В настоящем стандарте применяют следующий термин с соответствующим определением:

массовая доля лактулозы в молоке: Массовая доля лактулозы, определенная в соответствии с настоящим стандартом и выраженная в граммах на 100 г пробы.

3.2 В настоящем стандарте применяют следующие обозначения и сокращения:

НАДФ - ГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы-никотинамидадениндинуклеотидфосфат;

НАДФН - ГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы-никотинамидадениндинуклеотидфосфат, восстановленная форма;

ГЗ - ГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы-галактозидаза;

ГОД - глюкозооксидаза;

АТФ - аденозин-5'-трифосфат;

АДФ - аденозин-5'-дифосфат;

Г-6-Ф - глюкозо-6-фосфат;

Ф-6-Ф - фруктозо-6-фосфат;

ГК - гексокиназа;

Г6Ф-ДГ - глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа;

ФГИ - фосфоглюкозоизомераза;

КАТ - каталаза;

Е - международная единица, определяющая количество (активность) фермента, который служит катализатором для превращения 1 мкмоля вещества в минуту при 25 °С.

4 Сущность метода

4.1 Сущность метода

Метод основан на гидролизе лактулозы и лактозы [1], содержащихся в освобожденном от жира и белка водном экстракте пробы молока, в присутствии ГЗ с образованием моносахаров - галактозы, глюкозы и фруктозы; преобразовании фруктозы под действием НАДФ в присутствии ГК, ФГИ и Г6Ф-ДГ и фотометрическом измерении массовой доли образовавшегося НАДФН, эквивалентного массовой доле фруктозы, и расчете содержания лактулозы по разности оптических плотностей раствора пробы, в которой лактулоза подвергнута гидролизу, и раствора пробы, используемого при определении свободной фруктозы.

лактулоза +ГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозыГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозыгалактоза + фруктоза (1)


лактоза + ГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозыГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозыгалактоза + глюкоза (2)


В связи с тем, что в молоке содержится значительно больше лактозы чем лактулозы (массовые концентрации лактулозы в молоке приведены в приложении А), избыток глюкозы, образующейся при гидролизе лактозы, окисляют кислородом воздуха в присутствии ГОД и КАТ.

глюкоза + ГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы +ГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы ГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозыглюконовая кислота + ГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы (3)

2ГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы ГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы2ГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы+ГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы (4)


Неокисленную глюкозу, а также фруктозу, образовавшуюся в ходе гидролиза лактулозы, подвергают фосфорилированию под действием АТФ в присутствии ГК.

глюкоза + АТФГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозыГ-6-Ф + АДФ (5)

фруктоза + АТФГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозыФ-6-Ф + АДФ (6)


Образовавшийся Г-6-Ф под действием НАДФ в присутствии Г6Ф-ДГ окисляют до глюконат-6-фосфата. Количество восстановленной формы НАДФН измеряют по величине оптической плотности при длинах волн 334, 340 или 365 нм.

Г-6-Ф + НАДФ +ГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозыглюконат-6-фосфат + НАДФН + НГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы (7)

Образовавшийся в ходе реакции (6) Ф-6-Ф после добавления ФГИ изомеризуется (8) в Г-6-Ф, который окисляется в ходе реакции (7). Массовую долю НАДФН, эквивалентную массовой доле фруктозы, измеряют по величине оптической плотности при длинах волн 334, 340 или 365 нм.

Ф-6-ФГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозыГ-6-Ф (8)


Для предотвращения влияния свободной фруктозы, которая может находиться в исследуемой пробе, при проведении контрольного определения не проводят гидролиз лактулозы с помощью ГЗ. Массовую долю лактулозы рассчитывают по разности оптических плотностей раствора пробы и контрольного раствора.

5 Реактивы


При проведении анализа используют реактивы х.ч. или ч.д.а.

Вода, используемая для приготовления растворов ферментов, должна быть бидистиллированной.

Вода, используемая для приготовления растворов химических реагентов и подготовки проб, должна быть дистиллированной по ГОСТ 6709 или деминерализованной.

Допускается использовать имеющиеся в продаже готовые наборы реактивов для определения лактулозы при условии соответствия их качества требованиям настоящего стандарта.

5.1 Раствор сернокислого цинка

30 г сернокислого цинка по ГОСТ 4174 (ГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы) растворяют в 100 смГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы дистиллированной воды.

5.2 Раствор гексациано-(II)-феррата калия

15 г гексациано-(II)-феррата калия (ГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы) по ГОСТ 4207 растворяют в 100 смГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы дистиллированной воды.

5.3 Буферный раствор А активной кислотностью 7,5 рН

4,80 г гидрофосфата натрия (ГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы) по ГОСТ 4172, 0,86 г дигидрофосфата натрия (ГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы) по ГОСТ 245 и 0,10 г сернокислого магния по ГОСТ 4523 растворяют в 80 смГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы дистиллированной воды. Значение активной кислотности раствора доводят до 7,5 рН, добавляя раствор гидроокиси натрия по ГОСТ 4328 молярной концентрации ГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы1 моль/дмГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы. Объем раствора доводят дистиллированной водой до 100 смГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы. Приготовленного количества буферного раствора А достаточно для 15 определений.

5.4 Буферный раствор Б активной кислотностью 7,6 рН

14,0 г триэтаноламингидрохлорида [1] и 0,25 г сернокислого магния по ГОСТ 4523 растворяют в 80 смГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы дистиллированной воды. Активную кислотность раствора доводят до рН 7,6 добавляя раствор гидроокиси натрия по ГОСТ 4328 молярной концентрации ГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы1 моль/дмГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы. Объем раствора доводят дистиллированной водой до 100,0 смГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы. Приготовленного количества раствора достаточно для 60 определений.

5.5 Буферный раствор В

40 смГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы буферного раствора Б по 5.4 разбавляют дистиллированной водой до 100 смГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы. Приготовленного количества раствора В достаточно для 50 определений.

5.6 Натрий углекислый кислый, ГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы по ГОСТ 4201.

5.7 Раствор пероксида водорода по ГОСТ 10929 массовой долей 30%.

5.8 Октанол-1 [2]*.
_______________
* См. раздел Библиография. - Примечание изготовителя базы данных.

5.9 Гидроокись натрия по ГОСТ 4328, растворы молярных концентраций ГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы0,33 моль/дмГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы и ГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы1 моль/дмГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы.

5.10 Суспензия ГЗ

Сухой лиофилизат ГЗ (ЕС 3.2.1.23) из E.coli [3]* массой 0,005 г и активностью 150 Е суспендируют в 1 смГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы раствора сернокислого аммония по ГОСТ 3769 молярной концентрации ГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы3,2 моль/дмГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы (температура ферментативного гидролиза лактозы в качестве субстрата - 25 °С). Допускается использовать препарат ГЗ с более высокой активностью - 1500 Е (температура ферментативного гидролиза 2-нитрофенил-ГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы-D-галактозида в качестве субстрата - 37 °С). Суспензия устойчива при температуре 4 °С не менее 12 мес.
_______________
* См. раздел Библиография, здесь и далее по тексту. - Примечание изготовителя базы данных.

5.11 Препарат ГОД

Сухой лиофилизат ГОД (ЕС 1.1.3.4) [3] из Aspergillus niger второй степени очистки удельной активностью 200 Е/мг (температура ферментативного окисления глюкозы в качестве субстрата - 25 °С) или удельной активностью 230 Е/мг (температура ферментативного окисления глюкозы в качестве субстрата - 37 °С). Сухой препарат ГОД устойчив при температуре 4 °С не менее 12 мес.

5.12 Окислительный раствор

0,020 г сухого препарата ГОД по 5.11 растворяют в 1 смГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы бидистиллированной воды. Раствор готовят непосредственно перед применением.

5.13 Суспензия КАТ

0,020 г сухого лиофилизата КАТ (ЕС 1.11.1.6) [3] из говяжьей печени активностью 1300 Е суспендируют в 1 смГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы бидистиллированной воды (температура ферментативного окисления пероксида водорода в качестве субстрата - 25 °С). Суспензия КАТ устойчива при температуре 4 °С не менее 12 мес.

5.14 Суспензия ГК и Г6Ф-ДГ

0,002 г сухого лиофилизата ГК (ЕС 2.7.1.1) [3] из дрожжей активностью не менее 280 Е (температура ферментативного преобразования глюкозы в качестве субстрата в присутствии АТФ - 25 °С) и 0,001 г сухого лиофилизата Г6Ф-ДГ (ЕС 1.1.1.49) [3] из дрожжей [1] активностью не менее 140 Е (Г-6-Ф в качестве субстрата) суспендируют в 1 смГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы раствора сернокислого аммония молярной концентрации ГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы3,2 моль/дмГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы. Суспензия устойчива при температуре 4 °С не менее 12 мес.

5.15 Суспензия ФГИ

0,002 г сухого лиофилизата ФГИ (ЕС 5.3.1.9) [3] из дрожжей активностью не менее 700 Е (температура ферментативной изомеризации Ф-6-Ф в качестве субстрата - 25 °С) суспендируют в 1 смГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы раствора сернокислого аммония молярной концентрации ГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы3,2 моль/дмГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы. Суспензия устойчива при температуре 4 °С не более 12 мес.

5.16 Раствор АТФ

0,05 г динатриевой соли аденозин-5'-трифосфата (АТФ-ГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы) [1] и 0,05 г гидрокарбоната натрия по ГОСТ 4201 растворяют в 1 смГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы дистиллированной воды. Раствор устойчив при температуре 4 °С не более трех недель.

5.17 Раствор НАДФ

0,01 г динатриевой соли ГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы-никотинамидадениндинуклеотидфосфата (ГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы-НАДФ-ГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы) [1] растворяют в 1 смГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы дистиллированной воды. Раствор устойчив при температуре 4 °С не более трех недель.

6 Аппаратура


Обычная лабораторная аппаратура, а также:

6.1 Весы лабораторные общего назначения наибольшим пределом взвешивания 20 г, 2-го класса точности по ГОСТ 24104.

6.2 Дозаторы пипеточные объемами доз 0,02; 0,05; 0,10; 0,50; 1,0; 2,0; 5,0 и 10 смГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы и относительной погрешностью дозирования ±1% [4]* и пипетки градуированные номинальной вместимостью 2 и 10 смГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы по ГОСТ 29227.
_______________
* См. раздел Библиография. - Примечание изготовителя базы данных.

6.3 Колбы мерные номинальной вместимостью 10, 20 и 100 смГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы, 2-го класса точности по ГОСТ 1770.

6.4 Фильтры гофрированные бумажные диаметром 7 и 12,5 см по ГОСТ 12026.

6.5 Кюветы фотометрические из оптического стекла или пластмассы толщиной поглощающего слоя 1 см для измерений при длинах волн 334, 340 или 365 нм.

6.6 Шпатели пластиковые или палочки стеклянные оплавленные длиной от 10 до 15 см для перемешивания содержимого кюветы для фотометрических измерений.

6.7 Спектрофотометр или фотометр фотоэлектрический, позволяющий проводить измерения при длинах волн 334, 340 или 365 нм допускаемой абсолютной погрешностью измерений коэффициента пропускания ±1%.

6.8 Колба коническая со шлифом номинальной вместимостью 50 смГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы по ГОСТ 25336.

6.9 Воронка стеклянная диаметром 5,5 см по ГОСТ 25336.

6.10 Термостат водяной, позволяющий поддерживать температуру (40±2) °С.

7 Отбор проб


Отбор проб - по ГОСТ 26809.

8 Проведение испытания

8.1 Перед испытанием пробу хорошо перемешивают.

8.2 Приготовление разбавленного раствора пробы

Пробу молока массой 50,00 г количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 смГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы и доводят объем молока дистиллированной водой до метки. Содержимое колбы хорошо перемешивают.

8.3 Осветление разбавленного раствора пробы

10,0 смГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы разбавленного раствора пробы по 8.2 количественно переносят в коническую колбу со шлифом вместимостью 50 смГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы или в мерную колбу вместимостью 20 смГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы.

К раствору медленно добавляют 1,75 смГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы раствора сернокислого цинка по 5.1 и 1,75 смГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы раствора гексациано-(II)-феррата калия по 5.2. После добавления каждого реагента содержимое колбы энергично перемешивают.

К содержимому колбы добавляют 6,5 смГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы буферного раствора А по 5.3 и перемешивают. После выдержки в течение 20 мин содержимое колбы фильтруют через бумажный фильтр диаметром 12,5 смГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы.

8.4 Гидролиз лактулозы и лактозы

5,0 смГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы фильтрата по 8.3 количественно переносят в мерную колбу вместимостью 10 смГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы. В колбу добавляют 0,05 смГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы суспензии ГЗ по 5.10, закрывают и выдерживают при 40 °С в течение 10 ч.

8.5 Окисление глюкозы

В раствор 8.4 добавляют 2,0 смГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы буферного раствора В по 5.5; 0,1 смГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы окислительного раствора по 5.12; 1 каплю октанола-1 (пеногаситель); 0,5 смГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы раствора гидроокиси натрия по 5.9 молярной концентрации ГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы0,33 моль/дмГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы (для нейтрализации образующейся глюконовой кислоты); 0,05 смГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы раствора пероксида водорода по 5.7 и 0,1 смГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы суспензии КАТ по 5.13. Содержимое колбы перемешивают и выдерживают при 40 °С в течение 3 ч.

8.6 Фильтрация раствора

Объем раствора в колбе по 8.5 доводят до метки дистиллированной водой. Содержимое перемешивают и фильтруют через бумажный фильтр диаметром 7 см.

8.7 Контрольный раствор

В качестве контрольного служит разбавленный раствор пробы по 8.2, который обрабатывают согласно 8.3-8.6, не используя суспензию ГЗ для гидролиза лактулозы и лактозы.

8.8 Определение

8.8.1 Испытание раствора пробы проводят при комнатной температуре. Измерения оптической плотности раствора проводят на спектрофотометре (фотометре) при длине волны 340 нм, а при применении спектрофотометра с ртутной лампой - при длинах волн 334 или 365 нм.

8.8.2 Растворы пробы, ферментов, коферментов, а также буферные растворы дозируют в кювету спектрофотометра (фотометра) пипеточным дозатором или градуированной пипеткой. При дозировании пробы необходимо избегать попадания капель пробы на стенки кюветы.

8.8.3 Определение содержания лактулозы проводят в три этапа. Дозируемые в кювету спектрофотометра (фотометра) компоненты, последовательность их дозирования и объемы доз для первого этапа испытания указаны в таблице 1.


Таблица 1 - Первый этап испытания

В кубических сантиметрах

Компонент, дозируемый в кювету, и последовательность дозирования

Объем компонента, дозируемого в кювету

контроль

проба

Буферный раствор Б по 5.4

1,00

1,00

Раствор АТФ по 5.16

0,10

0,10

Раствор НАДФ по 5.17

0,10

0,10

Фильтрат

1,00 по 8.6

1,00 по 8.7

Дистиллированная вода

1,00

1,00



Содержимое кювет перемешивают шпателем или стеклянной палочкой, выдерживают при комнатной температуре 3 мин и затем измеряют оптические плотности контрольного раствора ГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы и раствора пробы ГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы на спектрофотометре или фотометре.

8.8.4 Второй этап испытания

Инициируют ферментативную реакцию, добавляя в каждую кювету по 0,02 смГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы суспензии ГК и Г6Ф-ДГ по 5.14.

Содержимое кювет перемешивают шпателем или стеклянной палочкой, выдерживают при комнатной температуре в течение 10 мин для завершения реакции и затем измеряют оптические плотности контрольного раствора ГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы и раствора пробы ГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы на спектрофотометре или фотометре.

8.8.5 Третий этап испытания

Инициируют изомеризацию фруктозы в глюкозу, добавляя в каждую кювету по 0,02 смГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы суспензии ФГИ по 5.15.

Содержимое кювет перемешивают шпателем или стеклянной палочкой, выдерживают при комнатной температуре в течение 10-15 мин для завершения реакции и затем измеряют оптические плотности контрольного раствора ГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы и раствора пробы ГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы на спектрофотометре или фотометре.

Примечание - Если рассчитанные разности оптических плотностей раствора пробы и контрольного раствора более 1,3, объем используемого в определении фильтрата по 8.6 (проба) и 8.7 (контроль) уменьшают. Для сохранения постоянным общего объема реакционной смеси в кювете (3,24 смГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы) увеличивают объем добавляемой дистиллированной воды.

9 Выражение результатов

9.1 Расчет

Вычисляют разности оптических плотностей для образца пробы ГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы и контрольного ГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы по формулам

ГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы (9)


ГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы (10)


Изменение оптической плотности, вызванное гидролизом лактулозы ГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы, вычисляют по формуле

ГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы (11)


Массовую долю ГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы лактулозы в пробе, г/100 г, вычисляют по формуле

ГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы, (12)


где ГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы - молярная масса лактулозы, г/моль (342,30 г/моль);

ГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы - общий объем раствора в кювете, смГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы (3,24 смГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы);

ГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы - молярный коэффициент поглощения НАДФН, дмГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы·ммольГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы·смГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы:

- при 340 нм - 6,3,

- при 365 нм - 3,4 (ртутная лампа),

- при 334 нм - 6,18 (ртутная лампа);

ГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы - толщина поглощающего слоя в кювете, см;

ГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы - объем пробы, смГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы (1,00 смГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы по 8.6);

ГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы - навеска пробы по 8.2, г.

За результат испытания принимают среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений, округленное 0,1 г /100 г.

9.2 Точность испытания

Показатели точности установлены при испытании проб молока, подвергнутого УВТ-обработке, массовой долей лактулозы 0,028 г/100 г пробы и при испытании проб стерилизованного молока массовой долей лактулозы 0,105 г/100 г пробы.

9.2.1 Сходимость

Абсолютное расхождение между результатами двух параллельных определений, выполненных в одной лаборатории, не должно превышать более чем в 5% случаев показатели сходимости г, г/100 г:

- 0,001 - для молока УВТ-обработки,

- 0,003 - для стерилизованного молока.

Среднеквадратичное отклонение результатов определений (ГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы), г/100 г, составляет:

- 0,00035 - для молока УВТ-обработки,

- 0,00106 - для стерилизованного молока.

9.2.2 Воспроизводимость

Абсолютное расхождение между результатами двух измерений, выполненных в двух лабораториях, не должно превышать более чем в 5% случаев показатель воспроизводимости ГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы, г/100 г:

- 0,003 - для молока УВТ-обработки,

- 0,008 - для стерилизованного молока.

Среднеквадратичное отклонение результатов измерений (ГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы), г/100 г, составляет:

- 0,00106 - для молока УВТ-обработки,

- 0,00283 - для стерилизованного молока.

10 Отчет об испытании


В отчете об испытании должны быть указаны:

- вид пробы;

- способ отбора пробы;

- массовая доля лактулозы в граммах на 100 г пробы;

- дата испытания.

ПРИЛОЖЕНИЕ А (справочное). Массовые концентрации лактулозы в молоке

ПРИЛОЖЕНИЕ А
(справочное)

     
Массовые концентрации лактулозы в молоке [5], [6]



Таблица A.1

Вид молока

Массовая концентрация, мг/100 смГОСТ Р 51939-2002 Молоко. Метод определения лактулозы

Сырое или пастеризованное молоко

0

Молоко после УВТ-обработки

5-71,5

Стерилизованное молоко

Более 71,5


ПРИЛОЖЕНИЕ Б (справочное). Библиография

ПРИЛОЖЕНИЕ Б
(справочное)


[1] Boehringer Mannheim. Methoden der enzymatischen BioAnalytik und Lebensmitteleanalytik mit Test-Combinationen, 1995

[2] ТУ 6-093506-78* Октанол-1
________________
* ТУ, упомянутые здесь и далее по тексту, не приводятся. За дополнительной информацией обратитесь по ссылке. - Примечание изготовителя базы данных.

[3] Номенклатура ферментов. Рекомендации Международного биохимического союза по номенклатуре и классификации ферментов, а также единицам ферментов и символам кинетики ферментативных реакций*. М. 1979
________________
* Документ является авторской разработкой. За дополнительной информацией обратитесь по ссылке. - Примечание изготовителя базы данных.

[4] ТУ 64-13329-81 Дозаторы пипеточные

[5] G.R.Andrews "Distinguishing pasteurized, UHT and sterilized milks by their lactulose content", Journal of the Society of Dairy Technology. - Vol. 37. - No. 3. - pp.92-95, 1984

[6] H.Geier, H.Klostermeyer "Formation of lactulose during heat treatment of milk", Milchwissenschaft. - Band 38, Nr. 8, S.475-477, 1983


____________________________________________________________________________
УДК 637.1.074:543.854.7:006.354 ОКС 67.100.10 Н19 ОКСТУ 9209

Ключевые слова: молоко, лактулоза, ферментативное определение, спектрофотометрия
____________________________________________________________________________



Последние документы

Copyright © 2018