ГОСТ Р 51428-99
Группа Н59
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
СОКИ ФРУКТОВЫЕ
Метод определения содержания винной кислоты с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии
Fruit juices. Method for determination of tartaric acid content using high performance liquid chromatography
ОКС 67.080*
ОКСТУ 9109
_________________
* В указателе "Национальные стандарты" 2005 г. ОКС 67.160.20. Здесь и далее по тексту.
- Примечание изготовителя базы данных.
Дата введения 2001-01-01
Предисловие
1 РАЗРАБОТАН Всероссийским научно-исследовательским институтом консервной и овощесушильной промышленности (ВНИИКОП)
ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 93 "Продукты переработки плодов и овощей"
2 ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 22 декабря 1999 г. N 583-ст
3 Стандарт гармонизирован с европейским стандартом ЕН 12137:1997* "Соки фруктовые и овощные. Определение винной кислоты в виноградном соке. Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии"
_______________
* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым здесь и далее по тексту, можно получить перейдя по ссылке на сайт http://shop.cntd.ru.- Примечание изготовителя базы данных.
4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
5 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Июль 2010 г.
1 Область применения
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на виноградный сок и подобные ему продукты, содержащие виноградный сок, и устанавливает метод определения содержания (массовой концентрации или массовой доли) винной кислоты с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).
Диапазон определения массовой концентрации (массовой доли) винной кислоты - от 1,0 до 10,0 г/дм
(г/кг).
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия
ГОСТ 4204-77 Реактивы. Кислота серная. Технические условия
ГОСТ 5817-77 Реактивы. Кислота винная. Технические условия
ГОСТ 24104-88* Весы лабораторные общего назначения и образцовые. Общие технические условия
_______________
* С 1 июля 2002 г. действует ГОСТ 24104-2001. На терротории Российской Федерации действует ГОСТ Р 53228-2008.
ГОСТ 26313-84 Продукты переработки плодов и овощей. Правила приемки, методы отбора проб
ГОСТ 26671-85 Продукты переработки плодов и овощей, консервы мясные и мясорастительные. Подготовка проб для лабораторных анализов
ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования
ГОСТ Р 51431-99 Соки фруктовые и овощные. Метод определения относительной плотности
ГОСТ Р 52501-2005 (ИСО 3696:1987) Вода для лабораторного анализа. Технические условия
3 Сущность метода
Метод основан на определении массовой концентрации или массовой доли винной кислоты в виноградном соке с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с применением ионоэксклюзивной колонки и спектрофотометрического детектора в ультрафиолетовой области спектра.
4 Средства измерений, лабораторное оборудование, реактивы и материалы
Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания 200 г, 2-го класса точности.
Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104 с наибольшим пределом взвешивания 500 г, 4-го класса точности.
Жидкостный хроматограф, состоящий из:
- насоса высокого давления с верхним пределом давления не менее 25 МПа и диапазоном регулирования подачи растворителя от 0,1 до 5 см/мин;
- петлевого устройства ввода пробы с рабочим объемом петли от 0,010 до 0,020 см;
- спектрофотометрического детектора с переменной длиной волны, позволяющего проводить измерение оптической плотности при длине волны 210 нм, снабженного проточной кварцевой кюветой вместимостью не более 0,01 см, с относительной погрешностью измерения оптической плотности не более 2%;
- регистрирующего устройства (самописца или интегратора), позволяющего проводить измерения при чувствительности 0,2 мВ/см с погрешностью записи в рабочих условиях не более 0,5%;
- термостата колонок, пригодного для поддержания рабочей температуры 40 °С;
- колонки длиной 300 мм, внутренним диаметром 7,8 мм, заполненной ионоэксклюзивным сорбентом на основе сополимера стирола с дивинилбензолом с привитыми сульфогруппами в водородной форме размером частиц 10 мкм;
- предколонки, заполненной катионитом в водородной форме.
Микрошприц вместимостью, обеспечивающей полное заполнение петли инжектора.
Колбы мерные по ГОСТ 1770 вместимостью 50, 100 и 500 см.
Пипетки по ГОСТ 29227 типа 2, исполнения 1, 1-го класса точности вместимостью 10 и 25 см.
Фильтры мембранные размером пор не более 0,5 мкм.
Кислота серная по ГОСТ 4204, х.ч.
Кислота винная по ГОСТ 5817, ч.д.а.
Вода для лабораторного анализа по ГОСТ Р 52501, категории 1.
Допускается использование других средств измерений, лабораторного оборудования и реактивов, по метрологическим и техническим характеристикам не уступающих указанным выше.
5 Отбор и подготовка проб
5.1 Отбор проб - по ГОСТ 26313.
5.2 Подготовка проб к испытаниям - по ГОСТ 26671.
Концентрированные продукты разводят водой до заданного значения относительной плотности в соответствии с нормативным или техническим документом на конкретный вид продукта. Относительную плотность разбавленной пробы определяют по ГОСТ Р 51431 и найденное значение указывают в протоколе испытаний.
6 Подготовка к проведению испытаний
Для приготовления растворов, используемых при проведении испытания, и подвижной фазы для ВЭЖХ используют только воду категории 1 по ГОСТ Р 52501.
6.1 Приготовление градуировочных растворов
Готовят серию градуировочных растворов винной кислоты в диапазоне массовых концентраций от 100 до 500 мг/дм. Для этого навеску винной кислоты массой 50 мг переносят в мерную колбу вместимостью 100 см, растворяют в небольшом количестве воды, объем содержимого в колбе доводят водой до метки. Получают градуировочный раствор винной кислоты массовой концентрации 500 мг/дм. Остальные градуировочные растворы готовят точным разведением первого раствора в соответствующее количество раз.
7 Проведение испытаний
7.1 Приготовление раствора пробы для хроматографического анализа
Проводят два параллельных определения.
Пробу объемом 25-50 см (25-50 г) помещают в мерную колбу вместимостью 500 см, добавляют около 300 см горячей воды температурой 80 °С - 85 °С, тщательно перемешивают и оставляют для охлаждения до комнатной температуры, после чего объем содержимого в колбе доводят до отметки водой, перемешивают и фильтруют через мембранный фильтр. Фильтрат используют для хроматографического анализа.
7.2 Хроматографический анализ
Хроматографический анализ градуировочных растворов и растворов пробы, приготовленных по 7.1, проводят при следующих условиях:
- состав подвижной фазы - раствор серной кислоты 
(
)=0,005 моль/дм;
- скорость потока подвижной фазы - 0,6 см/мин (для предотвращения чрезмерного давления скорость потока при кондиционировании колонки повышают постепенно, начиная с 0,2 см/мин);
- длина волны детектора - 210 нм;
- температура колонки - 40 °С;
- объем анализируемого раствора - полное заполнение петли инжектора;
- длительность анализа - 20 мин;
- ориентировочное время удерживания винной кислоты - 10 мин.
Анализ градуировочных растворов проводят непосредственно перед анализом каждой серии растворов проб.
Регистрируют высоту пика винной кислоты.
8 Обработка и оформление результатов испытаний
По результатам анализа градуировочных растворов строят градуировочный график зависимости высоты пика винной кислоты от ее массовой концентрации.
По градуировочному графику определяют массовую концентрацию винной кислоты в растворе пробы, соответствующую высоте пика винной кислоты на хроматограмме раствора пробы.
Массовую концентрацию винной кислоты в пробе 
, г/дм, вычисляют по формуле
, (1)
где - массовая концентрация винной кислоты в растворе пробы, определенная по градуировочному графику, мг/дм;
- объем приготовленного по 7.1 раствора пробы, см;
- объем пробы, взятый для приготовления раствора пробы по 7.1, см.
Массовую долю винной кислоты 
, г/кг, вычисляют по формуле
, (2)
где 
- масса навески пробы, взятой для приготовления раствора пробы по 7.1, г.
Вычисления проводят до второго десятичного знака.
Относительное расхождение между результатами двух параллельных определений, выполненных одним оператором при анализе одной и той же пробы с использованием одних и тех же средств измерений и реактивов в течение возможно минимального интервала времени, не должно превышать норматива оперативного контроля сходимости 6% (
=0,95). При соблюдении этого условия за окончательный результат испытания принимают среднеарифметическое результатов двух параллельных определений, округленное до первого десятичного знака.
Относительное расхождение между результатами двух определений, выполненных в двух лабораториях, не должно превышать норматива оперативного контроля воспроизводимости 15% (=0,95).
Пределы относительной погрешности определения массовой концентрации или массовой доли винной кислоты при соблюдении условий, регламентированных настоящим стандартом, не превышают ±10,5% (=0,95).
В протоколе испытаний указывают:
- информацию, необходимую для идентификации исследуемого продукта (вид продукта, происхождение, шифр);
- ссылку на настоящий стандарт;
- дату и способ отбора проб (по возможности);
- дату получения пробы для испытаний;
- дату проведения испытаний;
- результат испытаний с указанием погрешности и единицы измерений;
- соблюдение норматива контроля сходимости результатов;
- особенности проведения испытаний (разведение концентрированной пробы, относительную плотность разведенной пробы и пр.);
- отклонения условий проведения испытаний от описанных в стандарте, которые могли повлиять на результат испытаний.
_______________________________________________________________________________________
УДК 664.863.001.4:006.354 ОКС 67.080 Н59 ОКСТУ 9109
Ключевые слова: виноградный сок, винная кислота, определение содержания, высокоэффективная жидкостная хроматография
_______________________________________________________________________________________