ГОСТ 29311-92
Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия

ГОСТ 29311-92


Группа Р35

          
     
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

     
     
ГИДРОЛИЗАТЫ ПАНКРЕАТИЧЕСКИЕ ДЛЯ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД

     
Общие технические условия

Pancreatic hydrolyzates for bacterial nutrient media. General specifications



МКС 11.220
ОКП 93 8880

Дата введения 1993-01-01

     
     
ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ

1. РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Главным управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства и продовольствия

2. УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Комитета стандартизации и метрологии СССР от 28.02.92 N 187

3. ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

4. ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ

Обозначение НТД, на который дана ссылка

Номер пункта

ГОСТ 61-75

4.5.1

ГОСТ 1625-89

4.3.1

ГОСТ 1770-74

4.7.1

ГОСТ 3118-77

4.6.3.1

ГОСТ 4165-78

4.4.1

ГОСТ 4198-75

4.6.3.1

ГОСТ 4204-77

4.3.1; 4.6.3.1

ГОСТ 4233-77

4.7.1

ГОСТ 4328-77

4.2.1.1; 4.3.1; 4.4.1

ГОСТ 4478-78

4.5.1

ГОСТ 5959-80

1.2.3

ГОСТ 6709-72

4.2.1.1; 4.3.1; 4.4.1; 4.6.3.1

ГОСТ 10131-93

1.2.3

ГОСТ 10931-74

4.6.3.1

ГОСТ 12923-82

1.2.3

ГОСТ 13805-76

4.7.1

ГОСТ 14192-96

1.3.2

ГОСТ 17206-96

4.7.1; 4.7.2.1

ГОСТ 20730-75

4.2; 4.7.1

ГОСТ 25336-82

4.3.1; 4.7.1

ГОСТ 28085-89

4.8

ГОСТ 29227-91

4.2.1.1; 4.3.1; 4.4.1; 4.5.1; 4.7.1

ГОСТ 29251-91

4.3.1; 4.5.1; 4.7.1

ОСТ 64-009-86

1.2.2; 3.5

ТУ 6-09-5393-88

4.6.3.1

ТУ 38 1051835-88

1.2.2

ТУ 10-09-202-86

1.2.1

ТУ 64-2-179-78

1.2.1

ТУ 38.006.108-90

1.2.2; 3.5

ТУ 10-09-30-89

1.2.3

ТУ 10-09-202-86

1.2.1; 3.5

ТУ 6-09-20-88

4.2.1.1

5. ПЕРЕИЗДАНИЕ. Май 2004 г.


Настоящий стандарт распространяется на панкреатические гидролизаты мяса, мясопродуктов, крови, а также их белоксодержащих отходов с разным уровнем содержания аминокислот - высоким (N 1), средним (N 2) и низким (N 3), предназначенные для изготовления бактериальных питательных сред.

1. ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ

1. ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ

1.1. Характеристики

1.1.1. Панкреатические гидролизаты для бактериальных питательных сред должны изготавливать в соответствии с требованиями настоящего стандарта по технологическим регламентам или инструкциям, утвержденным в установленном порядке.

1.1.2. Панкреатические гидролизаты по физико-химическим и биологическим показателям должны соответствовать требованиям, указанным в табл.1.

Таблица 1

Наименование показателей

Номер гидролизатов


1

2

3

1. Внешний вид

Прозрачная жидкость, возможен белый осадок тирозина

2. Цвет

Темно-коричневый

Коричневый

Светло-коричневый

3. Общий азот, %, не менее

1,20

1,00

0,75

4. Аминный азот, %, не менее

0,7

0,5

0,3

5. Полипептиды, %, не менее

2,0

2,5

2,5

6. Аминокислоты*, %

Выше 6,5

4,5-6,5

Ниже 4,5

7. Азот аминокислот*, %

Выше 0,80

0,59-0,80

Ниже 0,59

8. Рост тест-штаммов микроорганизмов:

типичность

Рост должен быть типичным, колонии на плотной среде - в S-форме

интенсивность роста, ед. опт. плотности, не менее:

для Staphylococcus aureus штамм Лоссманов

0,45

0,40

0,35

для Escherichia coli штамм 675

0,60

0,60

0,50

для Streptococcus faecalis штамм 6783

0,40

0,40

0,25

9. Стерильность

Должен быть стерильным

________________
* В зависимости от методов контроля определяют один из показателей - содержание аминокислот или азота аминокислот.


1.2. Упаковка

1.2.1. Гидролизат расфасовывают стерильно или с добавлением 1% хлороформа в стеклянные флаконы вместимостью 200 смГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия по ТУ 10-09-202* или стеклянные бутыли вместимостью 0,5; 1,0; 2,5; 5,0; 10 или 20 дмГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия по ТУ 64-2-179*.
________________
* ТУ, упомянутые здесь и далее по тексту не приводятся. За дополнительной информацией обратитесь по ссылке. - Примечание изготовителя базы данных.

1.2.2. Флаконы закрывают резиновыми пробками по ТУ 38.006.108, закатывают алюминиевыми колпачками по ОСТ 64-009*; бутыли - резиновыми пробками по ТУ 38 1051835.
________________
* Документ не приводится. За дополнительной информацией обратитесь по ссылке., здесь и далее по тексту. - Примечание изготовителя базы данных.

1.2.3. Стеклянные флаконы с панкреатическим гидролизатом упаковывают в дощатые ящики по ГОСТ 10131. Каждый флакон обертывают алигнином по ГОСТ 12923 или ватой по ГОСТ 5959. Масса брутто не более 15 кг.

Стеклянные бутыли упаковывают в полиэтиленовые емкости или в ящики по ТУ 10-09-30, обеспечивающие их неподвижность и целостность.

1.3. Маркировка

1.3.1. На флаконы и бутыли наклеивают бумажные этикетки с указанием:

наименования ведомства;

наименования предприятия-изготовителя и его товарного знака;

наименования препарата;

количества препарата в бутыли;

номера серии;

номера контроля;

даты изготовления;

срока годности;

условий хранения;

обозначения настоящего стандарта.

1.3.2. На каждое грузовое место (ящик, емкость) наносят транспортную маркировку по ГОСТ 14192 с указанием манипуляционных знаков "Хрупкое. Осторожно!", "Ограничение температуры" и предупредительную надпись "Биопрепараты".

Маркировка, характеризующая упакованную продукцию, должна содержать следующие данные:

наименование предприятия-изготовителя;

наименование препарата;

количество препарата в ящике;

номер серии;

дату изготовления;

срок годности;

условия хранения;

обозначение настоящего стандарта.

Не допускается совмещение транспортной маркировки и маркировки с данными об упакованной продукции на одной стороне ящика.

1.3.3. Внутрь каждого ящика или полиэтиленовой емкости вкладывают контрольный (упаковочный) лист с указанием: наименования предприятия-изготовителя; наименования препарата; количества препарата в ящике (полиэтиленовой емкости); номера серии; номера контроля; даты упаковки; срока годности; номера или фамилии упаковщика.

2. ТРЕБОВАНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ


Требования безопасности, производственной санитарии и санитарно-противоэпидемического режима выполняют в соответствии с "Правилами техники безопасности, производственной санитарии, санитарно-противоэпидемического режима для предприятий по производству бактерийных и вирусных препаратов", утвержденными Минздравом СССР.

3. ПРИЕМКА

3.1. Панкреатические гидролизаты принимают сериями. Под серией понимают определенное количество панкреатического гидролизата, изготовленное за один технологический цикл в одной емкости, одновременно расфасованное и оформленное одним документом о качестве с указанием номера контроля.

3.2. В документе о качестве должны быть указаны:

наименование предприятия-изготовителя и его товарный знак;

наименование препарата;

номер серии;

дата изготовления препарата;

номер документа о качестве;

дата выдачи документа о качестве;

количество препарата в серии;

результаты анализа;

срок годности препарата;

обозначение настоящего стандарта.

3.3. Каждая серия панкреатического гидролизата должна быть принята на предприятии-изготовителе контролером.

3.4. Для контроля качества гидролизата от каждой серии делают выборку. Выборку (ГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия) составляют из единиц упаковок, отобранных из разных мест серии, в количестве, рассчитанном по формуле

ГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия,


где ГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия - количество упаковок в серии.

3.5. При расфасовке гидролизата во флаконы из выборки отбирают шесть флаконов. Три из них используют для анализа, три - хранят в архиве контролера.

При расфасовке в бутыли из каждой бутыли отбирают точечную пробу объемом 100-500 смГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия. Точечные пробы соединяют вместе и составляют объединенную пробу объемом не менее 1,2 дмГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия. Объединенную пробу тщательно перемешивают и разливают во флаконы вместимостью 200 смГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия по ТУ 10-09-202. Половину флаконов передают в лабораторию для анализа, в остальные добавляют 1% хлороформа, закрывают резиновыми пробками по ТУ 38.006.108 и алюминиевыми колпачками по ОСТ 64-009 и обкатывают их. В архиве контролера хранят в течение 6 мес при температуре 4-10 °С.

3.6. Определение роста тест-штаммов микроорганизмов проводят по каждой десятой серии препарата.

3.7. При получении неудовлетворительных результатов испытаний хотя бы по одному из показателей по нему проводят повторные испытания на удвоенном количестве флаконов гидролизата, отобранных от той же серии. Результаты повторных испытаний распространяют на всю серию.

3.8. Контроль качества гидролизата по требованию потребителя проводит в течение срока годности профильная лаборатория ВГНКИ ветеринарных препаратов.

4. МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЙ

4.1. Определение внешнего вида и цвета

Внешний вид: наличие механической примеси, плесени, хлопьев, осадка устанавливают, просматривая флаконы с гидролизатом в проходящем свете, для чего флаконы встряхивают и переворачивают пробками вниз.

Цвет определяют визуально на белом фоне.

4.2. Определение общего азота - по ГОСТ 20730 или по методу Несслера.

4.2.1. Определение общего азота по методу Несслера

Сущность метода заключается в том, что получаемый в результате минерализации вещества сульфат аммония расщепляется в щелочной среде до аммиака. При рН 12 аммиак вступает в реакцию с реактивом Несслера. При этом образуется комплексное соединение ртути желто-оранжевого цвета, интенсивность окраски которого пропорциональна концентрации аммиака и может быть измерена колориметрически.

4.2.1.1. Аппаратура и реактивы

Фотоэлектроколориметр.

Пипетки по ГОСТ 29227.

Натрия гидроксид по ГОСТ 4328, 10%-ный раствор.

Реактив Несслера по ТУ 6-09-20.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

4.2.1.2. Подготовка к испытанию

Построение калибровочной кривой

Готовят стандартный раствор сернокислого аммония, 1 смГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия которого содержит 0,1 мкг азота: 0,4716 г аммония сернокислого ос.ч. или х.ч. растворяют в 1 дмГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия дистиллированной воды. В мерные колбы вместимостью 50 смГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия вносят 0,5-1,0-1,5-2,0-2,5-3,0 смГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия стандартного раствора, что соответствует 0,1-0,2-0,3-0,4-0,5-0,6 миллиграмм-процента азота. Добавляют до ГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия объема колбы дистиллированную воду, вносят 2,5 смГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия реактива Несслера, доводят водой до метки и перемешивают.

Измеряют на фотоэлектроколориметре при 440 нм (синий светофильтр) в кюветах с толщиной поглощающего свет слоя 1 см против кюветы с контрольным раствором (9,5 смГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия воды плюс 0,5 смГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия реактива Несслера).

4.2.1.3. Проведение испытания

Для минерализации в колбу Кьельдаля берут 0,5 смГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия предварительно профильтрованного гидролизата и 1,0 смГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия серной кислоты. Минерализат переносят в мерную колбу вместимостью 100 смГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия, многократно обмывая колбу Кьельдаля. Раствор доводят водой до метки и тщательно перемешивают.

В пробирку отбирают 0,5 смГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия раствора, добавляют 0,1 смГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия гидроксида натрия, перемешивают, добавляют 8,9 смГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия воды и 0,5 смГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия реактива Несслера.

В качестве оптического контроля используют образец, состоящий из 9,5 смГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия воды и 0,5 смГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия реактива Несслера.

Пробы тщательно перемешивают и через 2 мин колориметрируют при 440 нм (синий светофильтр) в кюветах с толщиной поглощающего свет слоя 1 см.

4.2.1.4. Обработка результатов

Массу общего азота (ГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия) в процентах вычисляют по формуле

ГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия,


где ГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия - масса азота, определенная по стандартной кривой, мг/%;

100 - коэффициент пересчета для первого разведения;

10 - коэффициент пересчета для второго разведения;

ГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия - объем гидролизата, используемый для определения, смГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия;

ГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия - объем 1-го разведения, используемый для реакции, смГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия;

1000 - коэффициент пересчета в грамм-проценты.

4.3. Определение аминного азота

Сущность метода заключается в связывании аминогруппы аминокислот формальдегидом и оттитровывании диссоциированной карбоксильной группы раствором щелочи.

4.3.1. Аппаратура, материалы и реактивы

pH-метр: иономер ЭВ-74 или другой прибор того же назначения.

Весы ВЛР-500 или другие того же класса точности.

Стаканы и колбы лабораторные по ГОСТ 25336.

Пипетки, бюретки по ГОСТ 29227, ГОСТ 29251.

Формалин технический по ГОСТ 1625.

Фенолфталеин раствор с массовой долей 1%.

Натрия гидроксид по ГОСТ 4328, раствор массовой концентрации ГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия моль/дмГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия.

Кислота серная по ГОСТ 4204, раствор массовой концентрации ГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия моль/дмГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

4.3.2. Подготовка к испытанию

Приготовление формальной смеси

К 50 смГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия отфильтрованного формалина добавляют 1 смГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия 1%-ного раствора фенолфталеина и доводят окраску до слабо-розовой добавлением раствора гидроксида натрия.

4.3.3. Проведение испытания

1 смГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия предварительно профильтрованного гидролизата вносят в широкий низкий стаканчик для pH-метрии, добавляют дистиллированную воду до достаточного погружения электродов рН-метра. Доводят рН раствора до 7,0 путем добавления нескольких капель раствора серной кислоты или гидроксида натрия.

Добавляют 2 смГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия формольной смеси. При этом рН сдвигается в связи с образованием свободных карбоксильных групп в кислую сторону. Титрование ведут раствором гидроксида натрия концентрации ГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия моль/дмГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия до рН 8,5.

4.3.4. Обработка результатов

Массу аминного азота в гидролизате (ГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия) в процентах вычисляют по формуле

ГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия,


где ГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия - объем раствора гидроксида натрия, израсходованный на титрование испытуемой пробы, смГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия;

ГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия - поправочный коэффициент к титру раствора гидроксида натрия концентрации ГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия моль/дмГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия:

ГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия - объем гидролизата, используемый для анализа, смГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия;

100 - коэффициент пересчета в проценты;

0,0014 - количество азота, соответствующее 1 смГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия раствора гидроксида натрия концентрации 0,1 моль/дмГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия, г.

4.4. Определение содержания полипептидов

Сущность метода заключается в биуретовой реакции - образовании красно-фиолетовых комплексов при реакции пептидов с солями окисной меди в щелочной среде.

4.4.1. Аппаратура, материалы, реактивы

Фотоэлектроколориметр или спектрофотометр.

Пробирки центрифужные.

Центрифуга настольная типа ОПн-8-14.

Пипетки по ГОСТ 29227.

Натрия гидрат окиси по ГОСТ 4328, 10%-ный раствор.

Медь сернокислая по ГОСТ 4165, 2%-ный раствор.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

4.4.2. Подготовка к испытанию

4.4.2.1. Построение калибровочного графика

Для построения калибровочного графика по оси абсцисс откладывают значение концентрации полипептидов в процентах и по оси ординат - значение оптической плотности раствора согласно данным, приведенным в табл.2.

Таблица 2

Концентрация полипептидов, %

Оптическая плотность ГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия

0,1

0,14

0,2

0,26

0,3

0,37

0,4

0,49

4.4.3. Проведение испытания

В две центрифужные пробирки вносят 0,5 смГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия гидролизата, 4,5 смГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия воды, добавляют 0,5 смГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия 10%-ного раствора гидроксида натрия и 0,5 смГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия 2%-ного раствора сернокислой меди. Смесь хорошо перемешивают после добавления каждого реактива.

Параллельно ставят контрольную пробу, для чего к 0,5 смГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия гидролизата добавляют 5,5 смГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия дистиллированной воды. Пробы центрифугируют с частотой вращения 3000-4000 минГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия по 10 мин.

Интенсивность окраски измеряют на фотоэлектроколориметре или спектрофотометре при 540 нм в кюветах с толщиной поглощающегося слоя 1 см. В качестве оптического контроля используют центрифугат контрольной пробы.

4.4.4. Обработка результатов

Концентрацию полипептидов в гидролизате (ГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия) в процентах определяют по калибровочному графику. Полученное значение умножают на коэффициент разведения, равный десяти.

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, допускаемое расхождение между которыми не должно превышать 5%.

4.5. Определение аминокислот

Сущность метода заключается в хроматографии аминокислот и индикации их при окраске нингидрином а-аминогрупп, с использованием автоматического анализатора.

Дополнительно определяется содержание триптофана титрометрическим методом в реакции с хлорамином.

4.5.1. Аппаратура и реактивы

Анализатор аминокислот.

Центрифуга настольная.

Пипетки, бюретки по ГОСТ 29227, ГОСТ 29251.

Кислота сульфосалициловая по ГОСТ 4478, концентрации 3%.

Реактивы для хроматографии аминокислот ос.ч. или х.ч. в соответствии с инструкцией к прибору.

Кислота уксусная ледяная по ГОСТ 61.

Хлорамин Б, 1%-ный водный раствор.

4.5.2. Подготовка к испытанию

4.5.2.1. Депротеинизация образца гидролизата

В центрифужную пробирку вносят 3 смГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия гидролизата и 3 смГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия сульфосалициловой кислоты. Смесь центрифугируют при 4-6 тыс. минГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия 15-20 мин. Разводят 1 смГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия супернатанта в 40-120 раз (из расчета содержания аминного азота в конечном разведении 4-5 миллиграмм-процента) бидистиллированной водой или буферным раствором рН 2,2, приготовленным в соответствии с инструкцией к прибору. Полученный раствор фильтруют.

4.5.3. Проведение испытания

0,5 смГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия фильтрата наносят на колонку аминокислотного анализатора. Хроматографию аминокислот проводят в соответствии с инструкцией к прибору.

При хроматографии с использованием двухколоночного метода и трех буферных растворов (рН 3,25; 4,25 и 5,28) обычно количественно определяют все аминокислоты, входящие в состав белка, за исключением триптофана. В этом случае для определения общего аминокислотного состава гидролизата содержание триптофана определяют отдельно.

4.5.4. Определение триптофана

В три пробирки берут по 1 смГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия предварительно профильтрованного гидролизата, добавляют по 1 смГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия ледяной уксусной кислоты и титруют свежеприготовленным раствором хлорамина, добавляя по 1 капле и тщательно встряхивая. По мере титрования появляется розовая окраска. Окончанием титрования является переход окраски из максимально розовой в палевую или желтую, который обычно происходит от одной капли хлорамина.

4.5.5. Обработка результатов

Массу аминокислот в гидролизате (ГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия) в процентах по хроматограмме вычисляют по формуле

ГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия,


где ГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия - массовая концентрация аминокислоты, мк моль/смГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия, рассчитанная в соответствии с инструкцией к прибору;

ГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия - молекулярная масса аминокислоты;

ГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия - коэффициент разведения образца;

10ГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия - коэффициент пересчета микрограммов в граммы;

100 - коэффициент пересчета в проценты.

Массовую долю триптофана (ГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия) в процентах рассчитывают по формуле

ГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия,


где ГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия - объем 1%-ного раствора хлорамина, израсходованный на титрование; смГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия;

1000 - коэффициент пересчета миллиграммов в граммы;

100 - коэффициент пересчета в проценты.

Общее содержание аминокислот (ГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия) определяют как сумму ГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия и ГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия

4.6. Определение азота аминокислот

Сущность метода заключается в расчете азота аминокислот как разности результатов содержания общего азота, азота полипептидов и нуклеотидов.

4.6.1. Определение азота полипептидов

Массу азота полипептидов (ГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия) в процентах вычисляют по формуле

ГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия,


где ГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия - количество полипептидов, %;

6,25 - коэффициент пересчета.

4.6.2. Определение азота нуклеотидов

Азот нуклеотидов определяют как эквивалент фосфору нуклеотидов.

4.6.3. Определение фосфора нуклеотидов

Сущность метода заключается в определении интенсивности окраски молибденовой сини с восстановлением хлористым оловом.

4.6.3.1. Аппаратура и реактивы

Фотоэлектроколориметр.

Кислота серная по ГОСТ 4204 концентрированная, концентрации ГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия моль/дмГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия.

Натрий молибденовокислый двуводный по ГОСТ 10931.

Олово хлористое, х.ч. или ч.д.а. по ГОСТ 36*.
________________
* На территории Российской Федерации документ не действует. Действуют ТУ 6-09-5393-88. - Примечание изготовителя базы данных.

Кислота соляная по ГОСТ 3118, концентрированная.

Калий фосфорнокислый однозамещенный по ГОСТ 4198.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Вода бидистиллированная.

4.6.3.2. Подготовка к испытанию

Приготовление серной кислоты концентрации ГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия моль/дмГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия. Берут 69,6 дмГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия серной кислоты плотностью 1,84 г/смГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия и разводят в бидистиллированной воде в мерной колбе вместимостью 1 дмГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия.

Приготовление молибдата натрия

Навеску молибдата натрия 18,75 г растворяют в 1 дмГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия серной кислоты концентрации ГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия моль/дмГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия. Раствор хранят в темной посуде с притертой пробкой.

Приготовление раствора хлорида олова.

10 г хлорида олова растворяют в 25 смГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия концентрированной соляной кислоты при нагревании. Хранят в темной посуде с притертой пробкой. Перед употреблением 0,5 смГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия раствора разводят в 100 смГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия бидистиллированной воды.

Приготовление стандартного раствора фосфора

Калий фосфорнокислый однозамещенный перекристаллизованный высушивают в эксикаторе над серной концентрированной кислотой в течение 6-7 дней. Навеску фосфата калия 0,4394 г разводят в 1 дмГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия дистиллированной воды в мерной колбе. 1 дмГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия раствора содержит 0,1 мг фосфора.

Построение калибровочной кривой

Для построения калибровочной кривой в мерные колбы вместимостью 100 смГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия берут стандартный раствор в количестве 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 смГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия и доводят до метки бидистиллированной водой.

В две пробирки наливают по 2,5 смГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия испытуемого раствора, добавляют по 2 смГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия раствора молибдата натрия, тщательно перемешивают, добавляют 0,5 смГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия раствора хлорида олова и снова перемешивают.

В контрольные пробирки наливают воду и остальные реактивы. Выдерживают 1 мин и колориметрируют при длине волны 670 нм (красный светофильтр) в кювете с толщиной поглощающего слоя 3 мм.

4.6.3.3. Проведение испытания

Из раствора минерализата, полученного по п.4.2.1.3, отбирают 2,5 смГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия, переносят в пробирку, добавляют 2 смГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия раствора молибдата натрия, тщательно перемешивают, добавляют 0,5 смГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия хлорида олова и снова перемешивают.

4.6.3.4. Обработка результатов

Массу фосфора нуклеотидов (ГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия) в процентах, равную количеству азота нуклеотидов, вычисляют по формуле

ГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия,


гдеГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия - количество фосфора, определенное по кривой, мг/%;

ГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия - объем гидролизата, используемый для анализа, смГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия;

100 - коэффициент пересчета на 100 смГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия гидролизата в проценты;

1000 - коэффициент пересчета из миллиграммов в граммы.

Масса азота аминокислот (ГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия) в процентах равна

ГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия.

4.7. Рост тест-штаммов микроорганизмов

4.7.1. Аппаратура, материалы и реактивы

Термостат с температурой нагрева (37±1)°С.

Фотоэлектроколориметр.

Автоклав.

Весы технические.

pH-метр.

Пипетки вместимостью 1, 2, 10 смГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия по ГОСТ 29227 и пипетки пастеровские стерильные.

Бюретки вместимостью 25 или 50 смГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия по ГОСТ 29251.

Пробирки стеклянные по ГОСТ 1770 с ватно-марлевыми пробками, стерильные.

Воронки для фильтрования по ГОСТ 25336.

Фильтры бумажные.

Чашки Петри, стерильные.

Петля платиновая.

МПБ (1:1) по ГОСТ 20730 и МПА в пробирках с ватно-марлевыми пробками, стерильные.

Пептон сухой ферментативный по ГОСТ 13805.

Агар микробиологический по ГОСТ 17206.

Натрия хлорид по ГОСТ 4233.

Культуры тест-штаммов микроорганизмов: Staphylococcus aureus штамм Лоссманов, Escherichia coli шт. 675, Streptococcus faecalis 6783.

4.7.2. Подготовка к испытанию

4.7.2.1. Приготовление питательных сред

Из испытуемого гидролизата готовят питательную среду с содержанием аминного азота 0,15-0,18%, полипептидов - не менее 1,5%, рН 7,4-7,6.

С этой целью гидролизат разводят по аминному азоту из расчета его содержания в разведении 0,15%. Добавляют, в случае необходимости, сухой ферментативный пептон до получения в среде указанного минимума полипептидов, а также 0,5% хлорида натрия. Устанавливают рН 7,6-7,8 добавлением 10%-ного раствора гидроксида натрия или соляной кислоты, кипятят 5-10 мин, охлаждают, доводят водой до первоначального объема и фильтруют. Если в процессе обработки рН среды сдвигается, его вновь доводят до указанных величин, после чего нагревают до кипения и снова фильтруют. Фильтрат разливают в пробирки по 8 смГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия, закрывают ватно-марлевыми пробками и пергаментными колпачками и стерилизуют в автоклаве в течение 30 мин при 1,5 кгс/смГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия.

Для приготовления агаровой среды в полученную после внесения ингредиентов жидкую питательную среду добавляют 2% микробиологического агара по ГОСТ 17206. Устанавливают рН 7,6-7,8. Среду кипятят до полного растворения агара, фильтруют и разливают в пробирки по 5 смГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия, в стерильные чашки Петри - толщиной слоя 5-8 мм. Пробирки закрывают ватно-марлевыми пробками и пергаментными колпачками, стерилизуют в автоклаве при тех же условиях, что и пробирки с жидкими средами.

Чашки Петри с плотными питательными средами устанавливают на горизонтальной поверхности, охлаждают до затвердевания среды, переворачивают вверх дном и помещают в термостат при (37±1)°С для подсушивания на 16-20 ч.

Плотные среды в пробирках перед употреблением необходимо скосить, для чего их расплавляют, затем охлаждают, установив пробирки в наклонном положении.

4.7.2.2. Хранение и освежение культур

Культуры тест-штаммов микроорганизмов хранят в лиофилизированном состоянии или в пробирках с полужидкой средой (0,1-0,2% агара), без глюкозы, под парафинированными пробками и резиновыми колпачками или с резиновыми пробками при температуре 4-6°С.

Перед употреблением культуры освежают. С этой целью сухие культуры из ампул или из пробирок с полужидкой средой рассевают в три пробирки с мясо-пептонным бульоном. Посев проводят пастеровскими пипетками или платиновой петлей. Пробирки с засеянной средой выдерживают в термостате при температуре (37±1)°С в течение 20-24 ч. Для последующей работы возможны еще два пассажа на жидкие питательные среды. В дальнейшем берут новую ампулу лиофилизированной культуры или пробирку с полужидким агаром.

4.7.2.3. Проведение испытания

В две-три пробирки с испытуемой и контрольной (МПБ) жидкими питательными средами вносят по 0,2 смГОСТ 29311-92 Гидролизаты панкреатические для бактериальных питательных сред. Общие технические условия 20-24-часовой бульонной культуры тест-штамма, а в две-три пробирки или чашки Петри с плотными средами (испытуемой и МПА) ее рассевают дробно бактериологической петлей. Инкубацию проводят 20-24 ч при температуре (37±1)°С.

Типичность роста культур на плотных и жидких питательных средах определяют визуально и под микроскопом. Рост должен быть типичным для каждого штамма микроорганизмов.

S. aureus - в бульоне вызывает значительное помутнение среды с выпадением обильного осадка, нередко с появлением пристеночного серовато-белого кольца или пленки. На плотной питательной среде - четко оформленные выпуклые круглые колонии диаметром 1-4 мм с ровными краями, золотисто-желтого, оранжевого или лимонного цвета.

Е. coli - дает обильный рост в бульонной среде при значительном ее помутнении, с образованием сероватого легкоразбивающегося осадка. На плотной среде - прозрачные сочные колонии с серовато-голубым отливом, сливающиеся между собой. Края колоний могут быть расплывчатыми или волнистыми.

S. faecalis - на агаровой среде образует мелкие 0,5-1 мм мутные, серовато-белые или сероватые зернистые нерезко очерченные колонии. На бульонной среде рост с образованием пристеночного и придонного мелкозернистого осадка.

Интенсивность роста в жидкой питательной среде оценивают на фотоэлектроколориметре при длине волны 630-670 нм в кювете с толщиной слоя светопропускания 5 мм против контрольной кюветы с исходной питательной средой.

4.8. Определение стерильности - по ГОСТ 28085.

5. ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ

5.1. Панкреатические гидролизаты транспортируют всеми видами транспорта в соответствии с правилами перевозок скоропортящихся грузов и багажа, действующими на данном виде транспорта.

5.2. Бутыли с гидролизатами хранят в рефрижераторе при температуре 4-10°C или в помещении при тех же температурах.

6. ГАРАНТИИ ИЗГОТОВИТЕЛЯ

6.1. Изготовитель гарантирует соответствие панкреатического гидролизата требованиям настоящего стандарта при соблюдении условий транспортирования, хранения и применения.

6.2. Гарантийный срок хранения панкреатического гидролизата N 1 - 6 мес, N 2 и 3 - 3 мес со дня изготовления.


Copyright © 2024