ГОСТ 16446-78
Группа Р31
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР
КОМПЛЕМЕНТ СУХОЙ ДЛЯ РЕАКЦИИ СВЯЗЫВАНИЯ КОМПЛЕМЕНТА
Технические условия
Lyophilizated compliment for the compliment fixation test. Specification
Срок действия с 01.01.1979
до 01.01.1984*
_______________________________
* Ограничение срока действия снято
по протоколу N 3-93 Межгосударственного Совета
по стандартизации, метрологии и сертификации
(ИУС N 5/6, 1993 год). - Примечание изготовителя базы данных.
РАЗРАБОТАН Всесоюзным государственным научно-контрольным институтом ветеринарных препаратов
Директор Д.Ф.Осидзе
Руководитель темы А.Н.Шаров
Исполнители: А.Н.Шаров, А.М.Силаев, М.К.Шевченко, Л.Я.Телишевская, А.А.Гринев, М.X.Демченко
ВНЕСЕН Министерством сельского хозяйства СССР
Член Коллегии А.Д.Третьяков
ПОДГОТОВЛЕН К УТВЕРЖДЕНИЮ Всесоюзным научно-исследовательским институтом стандартизации (ВНИИС)
Директор А.В.Гличев
УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета стандартов Совета Министров СССР от 9 марта 1978 г. N 635
ВЗАМЕН ГОСТ 16446-70
ВНЕСЕНЫ: Изменение N 1, утвержденное и введенное в действие с 01.05.87 Постановлением Госстандарта СССР от 15.12.86 N 3831, Изменение N 2, утвержденное и введенное в действие с 01.01.89 Постановлением Госстандарта СССР от 06.07.88 N 2629
Изменения N 1, 2 внесены изготовителем базы данных по тексту ИУС N 3, 1987 год, ИУС N 11, 1988 год
Настоящий стандарт распространяется на сухой комплемент, представляющий собой сыворотку крови морских свинок, стабилизированную сернокислым магнием и высушенную методом лиофилизации.
Сухой комплемент предназначен для применения в качестве компонента реакции связывания комплемента (РСК) в ветеринарии.
1. ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ
1. ТЕХНИЧЕСКИЕ ТРЕБОВАНИЯ
1.1. Сухой комплемент для реакции связывания комплемента готовят в соответствии с требованиями настоящего стандарта по технологическим правилам, утвержденным в установленном порядке.
1.2. По физико-химическим и биологическим свойствам сухой комплемент для РСК должен соответствовать требованиям и нормам, указанным в табл.1.
Таблица 1
Наименование показателя | Характеристика и норма |
Внешний вид | Пористая однородная масса белого или розового цвета, без плесени и посторонней примеси |
Растворимость препарата и прозрачность раствора | При добавлении в ампулу (флакон) физиологического раствора или дистиллированной воды в объеме, указанном на ампуле (флаконе), должен полностью раствориться в течение 2-3 мин. Раствор прозрачный, слегка опалесцирующий, желтовато-розового цвета |
Массовая доля сернокислого магния, % | 5,0±0,5 |
Влажность, %, не более | 3,0 |
Безвредность | Не должен вызывать гемолиза эритроцитов барана в отсутствии гемолизина |
Активность (титр) в гемолитической системе в разведении 1:20, не ниже | 0,31 |
2. ПРАВИЛА ПРИЕМКИ
2.1. Сухой комплемент для РСК принимают сериями. Под серией следует понимать определенное количество препарата, изготовленное в результате одноразового (одновременного) смешивания в одной емкости исходного сырья, разлитое в течение одного рабочего дня по ампулам (флаконам), замороженное и высушенное в одном или нескольких сушильных вакуум-аппаратах при одном и том же режиме, получившее свой номер и оформленное одним документом о качестве.
2.2. Каждая серия сухого комплемента для РСК должна быть принята на предприятии-изготовителе государственным контролером Всесоюзного государственного научно-контрольного института ветеринарных препаратов Министерства сельского хозяйства СССР.
2.3. Для контроля качества сухого комплемента от каждой серии отбирают 40 ампул (флаконов).
2.4. При получении неудовлетворительных результатов хотя бы по одному из показателей по нему проводят повторные испытания на удвоенном количестве ампул (флаконов), отобранных от той же серии сухого комплемента.
Результаты повторных испытаний распространяют на всю серию.
2.5. Контроль качества определенной серии сухого комплемента по требованию потребителя проводит государственный контролер на предприятии-изготовителе или Всесоюзный государственный научно-контрольный институт ветеринарных препаратов Госагропрома СССР.
(Измененная редакция, Изм. N 1, 2).
3. МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЙ
3.1. Метод отбора проб
3.1.1. Ампулы (флаконы) отбирают из разных мест упаковочных единиц. 20 ампул (флаконов) используют для испытаний, а 20 ампул (флаконов) хранят в архиве государственного контролера.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
3.2. Для определения внешнего вида, цвета, однородности, наличия или отсутствия посторонней примеси, плесени или изменения консистенции ампулы (флаконы) с сухим комплементом встряхивают и просматривают.
3.3. Для определения растворимости препарата и прозрачности раствора в ампулу (флакон) с сухим комплементом при помощи пипетки или шприца вливают физиологический раствор или дистиллированную воду в количестве, указанном на ампуле (флаконе). После встряхивания препарат должен полностью раствориться в течение 2-3 мин. Прозрачность раствора определяют визуально в проходящем свете при периодическом встряхивании.
3.4. Определение массовой доли сернокислого магния
3.4.1. Оборудование и реактивы
Для проведения испытания применяют:
колбы мерные вместимостью 100, 250 и 1000 см
по ГОСТ 1770-74;
колбы плоскодонные вместимостью 200 см, стаканы лабораторные по ГОСТ 25336-82;
воду дистиллированную по ГОСТ 6709-72;
аммиачный буферный раствор;
трилон Б, 0,1 н. раствор*;
_______________
* Здесь и далее. По всему тексту стандарта Изменением N 2 предлагается заменить слова: "0,1 н. раствор трилона Б" на "0,1 моль/дм (0,1 н.)". - Примечание изготовителя базы данных.
хромовые индикаторы: кислотный хром темно-синий или хромовый черный специальный;
фиксанал MgSO
·7H
O - 0,01 г-экв или MgSO·7HO по ГОСТ 4523-77, х.ч., ч.д.а.
(Измененная редакция, Изм. N 1, 2).
3.4.2. Подготовка к испытанию
3.4.2.1. Приготовление аммиачного буферного раствора.
Берут 2 г хлористого аммония и растворяют в дистиллированной воде, добавляют 10 см 25%-ного водного раствора аммиака и доводят объем дистиллированной водой до 100 см.
3.4.2.2. Приготовление растворов хромовых индикаторов.
0,5 г индикатора растворяют в 20 см аммиачного буферного раствора и доводят до 100 см этиловым спиртом.
3.4.2.1, 3.4.2.2. (Измененная редакция, Изм. N 1, 2).
3.4.2.3. Приготовление 0,1 н. раствора трилона Б.
Берут навеску 18,6 г трилона Б, растворяют в дистиллированной воде, доводят объем до 1 дм, перемешивают и фильтруют, если раствор получился мутным.
(Измененная редакция, Изм. N 2).
3.4.2.4. Установка титра трилона Б.
Готовят 0,01 н. раствор соли магния: растворяют содержимое фиксанала MgSO·7HO или навеску 1,2325 г MgSO·7HO в 1 дм дистиллированной воды. В колбу вместимостью 200 см вносят 100 см 0,01 н. раствора соли магния, 5 см аммиачного буферного раствора, 5-7 капель индикатора, смесь медленно титруют при интенсивном перемешивании 0,1 н. раствором трилона Б до отчетливого изменения цвета раствора.
Поправочный коэффициент к титру трилона Б (
) вычисляют по формуле
,
где 
- объем 0,1 н. раствора трилона Б, израсходованный на титрование 100 см 0,1 н. раствора MgSO*, см;
_______________
* Здесь и далее. По всему тексту стандарта Изменением N 2 предлагается заменить слова: "0,1 н. раствора MgSO" на "0,005 моль/дм (0,01 н.)". - Примечание изготовителя базы данных.
- поправочный коэффициент к титру 0,01 н. раствора MgSO.
(Измененная редакция, Изм. N 1, 2
3.4.3. Проведение испытания
Сухой комплемент из пяти ампул растворяют в дистиллированной воде, переносят в мерную колбу вместимостью 250 см и доводят объем до метки. Затем берут 50 см раствора, прибавляют к нему 5 см аммиачного буферного раствора, 5-6 капель раствора хромового индикатора и титруют при энергичном перемешивании 0,1 н. раствором трилона Б до изменения цвета раствора.
3.4.4. Обработка результатов
Массовую долю сульфата магния в препарате (
) вычисляют по формуле
,
где 
- объем 0,1 н. раствора трилона Б, израсходованный на титрование пробы, см; - поправочный коэффициент к титру 0,1 н. раствора трилона Б; 
- объем MgSO·7HO, соответствующий 1 см 0,1 н. раствора трилона Б, г; 
- объем комплемента в ампуле, см
.
3.4.3, 3.4.4. (Измененная редакция, Изм. N 1, 2).
3.5. Определение влажности
3.5.1. Аппаратура, материалы и реактивы
Для проведения испытания применяют:
весы аналитические;
шкаф сушильный лабораторный на 105 °С;
стаканчики для взвешивания с притертыми крышками (бюксы) по ГОСТ 25336-82 диаметром 2,5 см, высотой 3,5 см;
эксикатор по ГОСТ 25336-82.
(Измененная редакция, Изм. N 2).
3.5.2. Проведение испытания
В высушенную до постоянной массы бюксу помещают содержимое одной ампулы сухого комплемента (вскрытие ампул и перенос вещества в бюксу производят быстро в связи с большой гигроскопичностью материала). Бюксу с навеской взвешивают с погрешностью не более 0,0002 г. Пробу высушивают в сушильном шкафу при 100 °С в течение 1 ч. Затем бюксу охлаждают в эксикаторе в течение 30 мин и снова взвешивают.
3.5.3. Обработка результатов
Влажность (
) в процентах вычисляют по формуле
,
где 
- первоначальная масса навески сухого комплемента до высушивания, г;
- масса навески после высушивания, г.
За окончательный результат принимают среднее арифметическое результатов трех параллельных определений. Допускаемые расхождения между результатами параллельных определений не должны превышать 0,5%.
3.6. Определение активности (титра) и безвредности
Активность сухого комплемента определяют по полному (100%-ному) гемолизу эритроцитов в гемолитической системе.
Титром комплемента называют наименьшее его количество (наибольшее разведение), при котором в течение 10 мин при 37-38 °С наступает полный гемолиз 0,5 см 2,5%-ной взвеси эритроцитов барана в присутствии 0,5 см гемолитической сыворотки, взятой в удвоенном титре по ГОСТ 16445-78, в общем объеме жидкости 2,5 см.
Безвредность комплемента характеризуется полным отсутствием гемолиза эритроцитов барана в пробирке без гемолитической сыворотки.
3.6.1. Оборудование и реактивы
Для проведения испытания применяют:
центрифугу;
баню водяную;
штативы для пробирок;
пробирки стеклянные по ГОСТ 25336-82;
флаконы вместимостью 250 см;
колбы стеклянные вместимостью 50, 100 см по ГОСТ 1770-74;
бусы стеклянные или металлические;
воронки стеклянные;
иглы для взятия крови;
пипетки мерные вместимостью 1, 2, 5 и 10 см по ГОСТ 20292-74*;
________________
* На территории Российской Федерации действуют ГОСТ 29169-91, ГОСТ 29227-91-ГОСТ 29229-91, ГОСТ 29251-91-ГОСТ 29253-91. - Примечание изготовителя базы данных.
физиологический раствор хлористого натрия рН 6,8-7,2;
марлю.
3.6, 3.6.1. (Измененная редакция, Изм. N 1, 2).
3.6.2. Подготовка к испытанию
3.6.2.1. Приготовление 2,5%-ной взвеси эритроцитов барана.
Кровь у барана берут утром, до кормления, из яремной вены, во флакон со стеклянными или металлическими бусами или без них. Встряхивают 7-10 мин, затем фильтруют через марлю, эритроциты 3-5 раз отмывают физиологическим раствором путем центрифугирования с частотой вращения 2500 мин
по 10 мин до полного обесцвечивания промывной жидкости. Из осадка эритроцитов готовят 2,5%-ную взвесь на физиологическом растворе.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
3.6.2.2. Приготовление гемолитической системы
Готовят раствор гемолизина, взятого в удвоенном титре (при титре 1:1000 готовят разведение 1:500, для чего берут 0,1 см гемолизина и разводят в 49,9 см физиологического раствора, и т.д.), и смешивают с равным количеством взвеси эритроцитов путем медленного вливания его во взвесь эритроцитов при постоянном ее перемешивании. Гемолитическую систему выдерживают в водяной бане при температуре 37-38 °С в течение 30 мин.
Для использования в контроле оставляют в отдельных пробирках по 3-5 см взвесь эритроцитов и раствора гемолизина.
(Введен дополнительно, Изм. N 1).
3.6.3. Комплемент в разведении 1:20 на физиологическом растворе разливают в ряд пробирок в дозах с 0,1 см до 0,4 см, увеличивая дозу в каждой следующей пробирке на 0,03 см (0,10; 0,13; 0,16 см и т.д. в соответствии с табл.2). Затем в пробирки доливают физиологический раствор до 0,5 см общего объема жидкости (соответственно 0,40; 0,37; 0,34 см и т.д.). После этого в каждую пробирку вносят по 1 см физиологического раствора и по 1 см гемолитической системы. Одновременно в штатив устанавливают три пробирки контроля. В первую пробирку контроля вносят 0,5 см комплемента в разведении 1:20, 0,5 см взвеси эритроцитов и 1,5 см физиологического раствора; во вторую пробирку вносят 0,5 см взвеси эритроцитов, 0,5 см раствора гемолизина и 1,5 см физиологического раствора; в третью пробирку - 0,5 см взвеси эритроцитов и 2 см физиологического раствора (табл.2). Первая пробирка является контролем безвредности комплемента, вторая пробирка - контролем безвредности гемолизина, третья - резистентности эритроцитов.
Штатив с пробирками встряхивают и помещают в водяную баню при температуре 37-38 °С на 10 мин.
Таблица 2
Компоненты | Дозы компонентов, см | |||||||||||||
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | Контрольные пробирки | |||
1 | 2 | 3 | ||||||||||||
1. Комплемент в разведении 1:20 | 0,10 | 0,13 | 0,16 | 0,19 | 0,22 | 0,25 | 0,28 | 0,31 | 0,34 | 0,37 | 0,40 | 0,50 | - | - |
2. Физиологический раствор | 0,40 | 0,37 | 0,34 | 0,31 | 0,28 | 0,25 | 0,22 | 0,19 | 0,16 | 0,13 | 0,10 | - | - | - |
3. Гемолитическая система | 1,00 | 1,00 | 1,00 | 1,00 | 1,00 | 1,00 | 1,00 | 1,00 | 1,00 | 1,00 | 1,00 | - | - | - |
4. Взвесь эритроцитов | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | 0,50 | 0,50 | 0,50 |
5. Раствор гемолизина | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | - | 0,50 | - |
6. Физиологический раствор | 1,00 | 1,00 | 1,00 | 1,00 | 1,00 | 1,00 | 1,00 | 1,00 | 1,00 | 1,00 | 1,00 | 1,50 | 1,50 | 2,00 |
(Измененная редакция, Изм. N 1, 2).
3.6.4. Обработка результатов
Штатив с пробирками извлекают из бани и проводят учет реакций в проходящем свете. Комплемент считают активным при титре не ниже 0,31 и безвредным при отсутствии гемолиза эритроцитов в первой пробирке контроля.
4. УПАКОВЫВАНИЕ, МАРКИРОВКА, ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ И ХРАНЕНИЕ
_________________
* Наименование раздела. Измененная редакция, Изм. N 1.
4.1. Комплемент фасуют по 2 см в хорошо промытые стерильные ампулы БЦЖ или инсулиновые и пенициллиновые флаконы и подвергают лиофилизации. Ампулы запаивают под вакуумом, а флаконы заполняют азотом или сухим воздухом, закрывают пробками и закатывают алюминиевыми колпачками.
(Измененная редакция, Изм. N 1, 2).
4.2. На ампулу (флакон) наклеивают этикетку или несмываемой краской по стеклу наносят:
наименование биопрепарата;
объем его в миллилитрах;
номер серии.
(Измененная редакция, Изм. N 2).
4.3. Ампулы (флаконы) с сухим комплементом по 10-20 шт. упаковывают в картонные коробки с разделительными перегородками. На каждую коробку наклеивают или наносят этикетку, на которой указывают:
наименование и товарный знак предприятия-изготовителя;
наименование препарата;
номер серии;
номер госконтроля;
дату изготовления;
титр в гемолитической системе;
количество ампул (флаконов) в коробке;
количество доз в ампуле по титру;
количество физиологического раствора, которое необходимо ввести в ампулу (флакон) для превращения сухого комплемента в состояние "нативной сыворотки";
срок годности;
условия хранения;
фамилии и номер браковщика и укладчика;
обозначение настоящего стандарта.
4.4. Коробки с ампулами (флаконами) сухого комплемента упаковывают в деревянные, фанерные или полистироловые ящики массой брутто не более 15 кг. Внутрь каждого ящика вкладывают контрольный лист с указанием:
наименования препарата;
количества коробок в ящике;
номера серии;
даты упаковывания;
фамилии или номера упаковщика.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
4.5. Каждую транспортную единицу маркируют по ГОСТ 14192-77* с указанием следующих дополнительных данных:
________________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ 14192-96. - Примечание изготовителя базы данных.
наименования предприятия-поставщика и его адреса;
наименования организации-потребителя и его адреса;
наименования биопрепарата;
количества препарата в ящике;
массы брутто;
номера серии;
даты изготовления;
срока годности;
условий хранения;
обозначения настоящего стандарта.
4.6. Сухой комплемент транспортируют всеми видами транспорта при температуре 2-15 °С.
Допускается транспортировать препарат при более высокой температуре, но не выше 20 °С, при этом срок транспортирования должен быть не более 10 сут.
4.7. Сухой комплемент хранят в чистом, сухом и темном помещении при температуре 2-15 °С.
4.8. Срок годности сухого комплемента - 2 года со дня изготовления. По истечении указанного срока годность препарата устанавливают по соответствию показателя титра комплемента в гемолитической системе требованиям настоящего стандарта. Титр определяется потребителем перед постановкой реакции связывания комплемента.