ГОСТ 11285-93
Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия

ГОСТ 11285-93

Группа Н15

     
     
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ЖЕЛЕЗЫ ПОДЖЕЛУДОЧНЫЕ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА И СВИНЕЙ ЗАМОРОЖЕННЫЕ

Технические условия

Frozen pancreases of cattle and pigs. Specifications



МКС 67.120.10
ОКП 92 1831 1340, 92 1833 1340

Дата введения 1995-01-01


Предисловие

1 РАЗРАБОТАН Госстандартом России

ВНЕСЕН Техническим секретариатом Межгосударственного Совета по стандартизации, метрологии и сертификации

2 ПРИНЯТ Межгосударственным Советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол N 4 от 21 октября 1993 г.)

За принятие проголосовали:

Наименование государства

Наименование национального органа по стандартизации

Республика Беларусь

Госстандарт Республики Беларусь

Кыргызская Республика

Кыргызстандарт

Республика Молдова

Молдовастандарт

Российская Федерация

Госстандарт России

Республика Таджикистан

Таджикстандарт

Туркменистан

Главгосслужба "Туркменстандартлары"

Украина

Госстандарт Украины


3 Постановлением Комитета Российской Федерации по стандартизации, метрологии и сертификации от 2 июня 1994 г. N 160 межгосударственный стандарт ГОСТ 11285-93 введен в действие непосредственно в качестве государственного стандарта Российской Федерации с 1 января 1995 г.

4 ВЗАМЕН ГОСТ 11285-73

5 ПЕРЕИЗДАНИЕ

ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ

ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ

Обозначение НТД, на который дана ссылка

Номер пункта

ГОСТ 61-75

3.6.1

ГОСТ 245-76

3.7.1

ГОСТ 1770-74

3.6.1, 3.7.1

ГОСТ 3117-78

3.6.1

ГОСТ 3118-77

3.6.1, 3.7.1

ГОСТ 3760-79

3.6.1

ГОСТ 3769-78

3.7.1

ГОСТ 3773-72

3.6.1

ГОСТ 4025-95

3.6.1, 3.7.1

ГОСТ 4165-78

3.6.1

ГОСТ 4172-76

3.7.1

ГОСТ 4204-77

3.5.1, 3.6.1

ГОСТ 4328-77

3.6.1, 3.7.1

ГОСТ 5556-81

3.6.1

ГОСТ 5830-79

3.5.1

ГОСТ 5962-67

3.6.1, 3.7.1

ГОСТ 6006-78

3.6.1

ГОСТ 6552-80

3.7.1

ГОСТ 6709-72

3.6.1, 3.7.1

ГОСТ 9412-93

3.6.1

ГОСТ 10131-93

1.3.1

ГОСТ 10354-82

1.3.2

ГОСТ 12026-76

3.4.1, 3.6.1, 3.7.1

ГОСТ 13513-86

1.3.1

ГОСТ 14192-96

1.2.2

ГОСТ 20469-95

3.6.1

ГОСТ 21650-76

4.1

ГОСТ 23094-78

3.5.1

ГОСТ 24104-88

3.4.1, 3.5.1, 3.6.1, 3.7.1

ГОСТ 24597-81

4.1

ГОСТ 25336-82

3.4.1, 3.5.1

ГОСТ 26663-85

4.1



Настоящий стандарт распространяется на замороженные поджелудочные железы крупного рогатого скота и свиней, признанные ветеринарным контролем годными для производства инсулина.

Требования настоящего стандарта являются обязательными.

1 Технические требования

     1 Технические требования


Поджелудочные железы должны быть собраны раздельно от каждого вида скота и обработаны по технологической инструкции с соблюдением санитарных правил для предприятий мясной промышленности и соответствовать требованиям настоящего стандарта.

1.1 Характеристики

1.1.1 В зависимости от вида скота поджелудочные железы подразделяют на:

поджелудочные железы крупного рогатого скота;

поджелудочные железы свиней.

В зависимости от качества поджелудочные железы подразделяют на два сорта: первый и второй.

Не допускается смешение поджелудочных желез разных видов скота.

1.1.2 По органолептическим и физико-химическим показателям поджелудочные железы должны соответствовать требованиям, указанным в табл.1.


Таблица 1

Наименование показателя

Характеристика и норма для поджелудочной железы

крупного рогатого скота

свиней

I сорта

II сорта

I сорта

II сорта

Внешний вид

Железы должны быть очищены от наружного жира и прирезей соединительной ткани, иметь цельную поверхность без повреждений и заморожены поштучно или в виде пластин или блоков толщиной не более 5 см

Цвет

От розового с желтоватым оттенком до розовато-красного

От бледно-желтого до розового с белыми нитевидными включениями

Температура внутри блока или отдельной железы при приемке, °С, не выше

Минус 18

Массовая доля жира, %, не более

5

7

8

12

Массовая доля инсулина, Ед/кг, не менее

5000

4000

5000

4000


1.2 Маркировка

1.2.1 В каждый ящик вкладывают ярлык с указанием:

наименования предприятия-изготовителя, его подчиненности и (или) его товарного знака;

наименования железы (с указанием вида скота) и ее сорта;

даты сбора железы;

массы нетто и брутто, кг;

срока и условий хранения;

номера упаковщика;

обозначения настоящего стандарта.

1.2.2 Транспортная маркировка - по ГОСТ 14192 с нанесением манипуляционного знака "Ограничение температуры".

Маркировку, характеризующую продукцию, наносят на каждую единицу тары несмываемой непахнущей краской при помощи штампа, трафарета или наклеивания ярлыка с указанием дополнительных данных:

наименования предприятия-изготовителя, его подчиненности и (или) его товарного знака;

наименования железы (с указанием вида скота) и ее сорта;

даты сбора железы;

массы нетто и брутто, кг;

срока и условий хранения;

обозначения настоящего стандарта.

1.3 Упаковка

1.3.1 Замороженные поджелудочные железы одного вида скота и сорта упаковывают в дощатые ящики по ГОСТ 10131 или в ящики из гофрированного картона по ГОСТ 13513.

1.3.2 Ящики должны быть чистыми, сухими, выстланы внутри полиэтиленовой пленкой по ГОСТ 10354. Допускаются другие полимерные пленки, разрешенные к применению органами здравоохранения. В заполненных ящиках выступающие края пленки должны полностью закрывать сверху поджелудочные железы. Укладывание поджелудочных желез в ящики должно быть плотным, не допускающим их перемещения при встряхивании.

2 Приемка

2.1 Поджелудочные железы принимают партиями. Под партией понимают любое количество замороженных поджелудочных желез одного вида скота и сорта, предназначенное к одновременной сдаче-приемке и оформленное одним документом о качестве установленной формы.

2.2 Соответствие упаковки, маркировки требованиям настоящего стандарта и отсутствие следов подмокания и подтеков проверяют на каждом ящике.

2.3 Для проверки соответствия качества поджелудочных желез требованиям настоящего стандарта из разных мест партии отбирают выборку в объеме 5% упаковочных единиц, но не менее пяти ящиков.

2.4 При получении неудовлетворительных результатов испытаний хотя бы по одному показателю по нему проводят повторные испытания удвоенного количества выборок, взятых от той же партии. Результаты повторных испытаний распространяют на всю партию.

2.5 При повышенной массовой доле жира в поджелудочных железах второго сорта они могут быть приняты по согласованию с потребителем.

2.6 Массовую долю инсулина определяют по требованию потребителя.

3 Методы испытаний

3.1 Отбор и подготовка проб

Для проведения испытаний при замораживании поджелудочных желез поштучно берут не менее чем по пять желез из каждого ящика, а при замораживании поджелудочных желез в блоках из разных слоев каждого ящика, отобранного в выборку, отбирают точечные пробы массой 180-200 г. Из точечных проб составляют объединенную пробу массой (1000±20) г, измельчают на мясорубке и тщательно перемешивают, не допуская поднятия температуры в измельченной пробе выше 4 °С.

3.2 Определение внешнего вида и цвета

Внешний вид и цвет замороженных поджелудочных желез определяют визуально при дневном свете.

Целостность желез и наличие на них прирезей жировой и соединительной тканей определяют после частичного оттаивания взятых на анализ желез путем визуального осмотра.

3.3 Определение температуры

3.3.1 Аппаратура

Термометр стеклянный жидкостный (не ртутный), вмонтированный в металлическую оправу, с диапазоном измерения от минус 38 до 0 °С с допускаемой погрешностью измерения ±1 °С.

3.3.2 Проведение испытания

В замороженной поштучно или в виде блоков (пластин) поджелудочной железе делают отверстие и термометром измеряют температуру на глубине (2,0±0,5) см. Отверстие можно сделать коловоротом вручную. Сверло коловорота должно быть предварительно охлаждено до температуры не выше минус 18 °С.

3.4 Определение массовой доли жира с использованием экстракционного аппарата Сокслета

3.4.1 Аппаратура, материалы, реактивы

Весы лабораторные по ГОСТ 24104* общего назначения 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г.
_______________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ 24104-2001, здесь и далее по тексту. - Примечание изготовителя базы данных.


Шкаф сушильный, обеспечивающий заданный температурный режим (105±0,5) °С.

Эксикатор 2-290 по ГОСТ 25336.

Аппарат Сокслета с экстракционной колбой вместимостью 150 смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия.

Стаканчики для взвешивания СВ-24/10 по ГОСТ 25336.

Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026.

Песок очищенный.

Вата обезжиренная.

Эфир петролейный по нормативному документу с температурой кипения 40-60 °С или эфир этиловый по нормативному документу, х.ч.

3.4.2 Проведение испытания

5 г измельченной поджелудочной железы взвешивают с точностью до 0,01 г в предварительно доведенном до постоянной массы стаканчике с (5,5±0,5) г очищенного песка. Навеску железы тщательно перемешивают с песком и высушивают в сушильном шкафу при температуре (100±0,5) °С в течение 2 ч. Высушенную навеску количественно переносят в бумажную гильзу, на дно которой кладут кусочек обезжиренной ваты. Стаканчик после переноса высушенной навески протирают ватой, смоченной эфиром, и помещают ее в гильзу. Гильзу тщательно закрывают, высушивают в сушильном шкафу при температуре (105±0,5) °С до постоянной массы и помещают в экстрактор аппарата Сокслета. Экстракцию ведут 6 ч при 6-10 сливах экстракта в 1 ч. Полноту обезжиривания проверяют, нанося на фильтровальную бумагу каплю растворителя, стекающего из экстрактора. Процесс считают законченным при отсутствии жирного пятна на бумаге после испарения растворителя. По окончании экстракции гильзу высушивают сначала под тягой, потом в сушильном шкафу при температуре (105±0,5) °С до постоянной массы.

3.4.3 Обработка результатов

3.4.3.1 Массовую долю жира (ГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия) в процентах вычисляют по формуле

ГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия,

где ГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия - масса гильзы с навеской до экстрагирования, г;

ГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия - масса гильзы с навеской после экстрагирования, г;

ГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия - масса навески поджелудочной железы, г.

3.4.3.2 За окончательный результат испытаний принимают среднее арифметическое значение результатов двух параллельных определений, рассчитанное до второго и округленное до первого десятичного знака.

3.4.3.3 Допускаемое расхождение между результатами двух параллельных определений при ГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия0,95 не должно превышать 14% по отношению к среднему арифметическому значению.

3.4.3.4 Допускаемое расхождение между результатами испытаний, проведенных в двух разных лабораториях, при ГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия0,95 не должно превышать 18% по отношению к среднему арифметическому значению.

3.5 Определение массовой доли жира с использованием жиромера

3.5.1 Аппаратура, материалы, реактивы

Весы лабораторные по ГОСТ 24104 общего назначения 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г.

Центрифуга ЦЛМП-24.

Термометр стеклянный жидкостный (не ртутный) с диапазоном измерения температуры 0-100 °С с допускаемой погрешностью измерения ±1 °С.

Баня для подогрева жиромеров по нормативному документу.

Жиромеры по ГОСТ 23094.

Штатив химический.

Пробирки П4-10-14/23 ХС по ГОСТ 25336.

Бюретка 1-2-25-0,1.

Спирт изоамиловый по ГОСТ 5830, ч.д.а., плотностью 0,8108 г/смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия.

Кислота серная по ГОСТ 4204, х.ч., плотностью 1,835 г/смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия, раствор 600 г/дмГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия.

3.5.2 Проведение испытания

Навеску измельченной поджелудочной железы массой (5±0,1) г помещают в пробирку, приливают 5 смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия 600 г/дмГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия раствора серной кислоты и гидролизуют на водяной бане при температуре (78±2) °С, периодически тщательно встряхивая содержимое пробирки до получения однообразной бурой массы.

Содержимое пробирки количественно переносят в жиромер, многократно обмывая ее стенки 600 г/дмГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия раствором серной кислоты. Пробы переносят при температуре (78±2) °С.

В молочный жиромер переносят гидролизат поджелудочной железы крупного рогатого скота, в сливочный жиромер - гидролизат поджелудочной железы свиней.

В жиромер из бюретки приливают 4 смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия изоамилового спирта, доводят объем жиромера до плечиков, приливая из бюретки 600 г/дмГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия раствора серной кислоты. Смесь перемешивают, переворачивая жиромер 7-10 раз, затем пробкой вниз помещают на 10 мин в предварительно нагретую до (78±2) °С водяную баню, после чего жиромеры переносят в центрифугу, располагая их узким концом к центру, и центрифугируют при скорости 1500 об/мин в течение 10 мин. После чего жиромеры вновь помещают на 10 мин в водяную баню и затем снимают показатель жиромера.

При отсутствии четкой границы раздела между жиром и растворителем взбалтывание, нагревание и центрифугирование повторяют.

3.5.3 Обработка результатов

3.5.3.1 Массовую долю жира (ГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия) в процентах вычисляют по формуле

ГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия,

где ГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия - высота столбика жира по шкале жиромера, деления;

ГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия - масса жира, соответствующая одному делению жиромера (0,011564 г - одно деление молочного жиромера; 0,052343 г - одно деление сливочного жиромера), г;

ГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия - масса навески поджелудочной железы, г.

3.5.3.2 За окончательный результат испытаний принимают среднее арифметическое значение результатов двух параллельных определений, рассчитанное до второго и округленное до первого десятичного знака.

3.5.3.3 Допускаемое расхождение между результатами двух параллельных определений при ГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия0,95 не должно превышать 15% по отношению к среднему арифметическому значению.

3.5.3.4 Допускаемое расхождение между результатами испытаний, проведенных в двух разных лабораториях, не должно превышать 20% по отношению к среднему арифметическому значению при ГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия0,95.

3.6 Определение массовой доли инсулина методом ионообменной хроматографии на колонках

3.6.1 Аппаратура, материалы, реактивы

Весы лабораторные по ГОСТ 24104 общего назначения 3-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 500 г.

Весы лабораторные по ГОСТ 24104 общего назначения 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г.

Мясорубка бытовая по ГОСТ 4025 или электромясорубка бытовая по ГОСТ 20469 с отверстиями решетки диаметром от 3 до 4 мм.

Колориметр фотоэлектрический лабораторный по нормативно-технической документации с устройством для отсчитывания значения оптической плотности и светофильтром с ГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия(600±10) нм или спектрофотометр для измерения в видимой области спектра.

Потенциометр с погрешностью измерения не более ±0,05 рН.

Центрифуга ЦЛР-1.

Термометр стеклянный жидкостный с диапазоном измерения от 0 до 100 °С с допускаемой погрешностью измерения ±1 °С.

Мешалка.

Тарелки мелкие столовые диаметром 20 см.

Кювета эмалированная для окрашивания хроматограмм.

Пробирки П4-10-14/23 ХС по ГОСТ 25336.

Воронка В-56-80 ХС по ГОСТ 25336.

Цилиндры 1-25, 1-50, 1-100 по ГОСТ 1770.

Колонки стеклянные диаметром (30±5) мм, высотой (400±50) мм.

Пипетки 4-2-1; 4-2-2; 4-2-5; 8-2-0,1.

Марля медицинская по ГОСТ 9412.

Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026.

Бумага хроматографическая быстрая (ленинградская или импортная) марки Б или С.

Вата медицинская гигроскопическая по ГОСТ 5556.

Натрия гидроокись по ГОСТ 4328, х.ч., растворы 1 и 0,01 моль/дмГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия и 200 г/дмГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия.

Кислота соляная по ГОСТ 3118, х.ч., плотностью 1,19 г/смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия, растворы 1; 0,5 и 0,1 моль/дмГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия, 180 г/дмГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия.

Кислота серная по ГОСТ 4204, х.ч., плотностью 1,835 г/смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия.

Кислота уксусная ледяная по ГОСТ 61, х.ч., растворы 20 и 800 г/смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия.

Медь (II) серно-кислая 5-водная по ГОСТ 4165, ч.д.а., раствор 125 г/дмГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия.

Индикатор бромфеноловый синий водорастворимый по нормативному документу, ч.д.а.

Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962*, растворы 650, 700 и 800 г/дмГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия.
________________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 51652-2000.

Инсулин кристаллический с активностью (25±1) Ед/мг.

Аммоний уксусно-кислый по ГОСТ 3117, ч.д.а., раствор 0,2 моль/дмГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия.

Аммоний хлористый по ГОСТ 3773, х.ч., раствор 0,2 моль/дмГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия.

Аммиак по ГОСТ 3760, ч.д.а., плотностью 0,91 г/дмГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия, раствор 125 г/дмГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия.

Кислота трихлоруксусная кристаллическая по нормативному документу, ч., раствор 100 г/дмГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия.

Бутанол-1 по ГОСТ 6006, ч.д.а., плотностью 0,8092 г/смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Катионит КУ 23 И по нормативному документу.

Допускается использование аппаратуры с техническими и метрологическими характеристиками не хуже, а также реактивов по качеству не ниже указанных в настоящем

стандарте.

3.6.2 Подготовка к испытанию

3.6.2.1 Приготовление системы растворителей

Бутанол-1, 800 г/дмГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия, раствор уксусной кислоты и дистиллированную воду смешивают в соотношении 3:1:5.

3.6.2.2 Приготовление стандартного раствора инсулина

Навеску инсулина (9,6±0,1) мг с активностью (25±1) Ед/мин растворяют в 6 смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия раствора соляной кислоты концентрации 0,1 моль/дмГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия. Полученный раствор содержит 40 Ед инсулина в 1 смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия.

3.6.2.3 Приготовление красителя бромфенолового синего

Навеску 0,5 г индикатора бромфенолового синего водорастворимого растворяют в 40 смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия дистиллированной воды, разводят в 920 смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия раствора уксусной кислоты концентрации 20 г/дмГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия, затем добавляют 40 смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия раствора серно-кислой меди концентрации 125 г/дмГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия.

3.6.2.4 Приготовление 0,2 моль/дмГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия раствора аммония уксусно-кислого рН (5,25±0,05)

Навеску 15,4 г аммония уксусно-кислого растворяют в дистиллированной воде и доводят объем раствора до 1 дмГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия, рН корректируют ледяной уксусной кислотой.

3.6.2.5 Приготовление 0,2 моль/дмГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия раствора аммония хлористого рН (9,5±0,2)

Навеску 10,7 г аммония хлористого растворяют в дистиллированной воде и доводят объем до 1 дмГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия. рН раствора регулируют раствором соляной кислоты концентрации 180 г/дмГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия или раствором аммиака концентрации 125 г/дмГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия.

3.6.2.6 Подготовка катионита КУ 23 И

Предварительно просеянный катионит КУ 23 И диаметром зерен не менее 0,3 мм во влажном состоянии вносят в колонки, предварительно заполненные дистиллированной водой. Через слой катионита (на 60 г суховоздушной смолы) пропускают 2 дмГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия раствора гидроокиси натрия концентрации 1 моль/дмГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия, 1 дмГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия дистиллированной воды, 2 дмГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия раствора соляной кислоты концентрации 1 дмГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия, 100 смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия раствора этилового спирта концентрации 700 г/дмГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия. Если катионит не был в употреблении, то описанную операцию повторяют дважды. Скорость пропускания растворов - 10 смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия/ми

3.6.3 Проведение испытания

К навеске измельченной поджелудочной железы массой 500 г добавляют 1,75 дмГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия раствора этилового спирта концентрации 800 г/дмГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия, подкисленного 2,25 смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия концентрированной серной кислоты, и перемешивают в течение 7 мин мешалкой при температуре (15±1) °С со скоростью (13±1) об/мин, затем приливают 16 смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия раствора соляной кислоты концентрации 0,5 моль/дмГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия и продолжают перемешивание в течение 2 ч. После чего отделяют экстракт от жмыха при помощи воронки через двойной слой марли. Жмых заливают 0,75 дмГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия раствора этилового спирта концентрации 650 г/дмГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия и перемешивают в течение 40 мин. Отделяют экстракт от жмыха через двойной слой марли. Первый и второй экстракты объединяют, добавляют 200 г/дмГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия раствора гидроокиси натрия, устанавливая рН (4,5±0,1) (потенциометрически).

Образовавшийся осадок через 5 мин отделяют фильтрацией через складчатый бумажный фильтр. Полученный фильтрат после установления в нем рН (3,5±0,1) (потенциометрически) 180 г/дмГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия раствором соляной кислоты направляют на сорбцию.

Сорбцию инсулина осуществляют на предварительно подготовленном катионите КУ 23 И, помещенном в количестве (60±5) г в стеклянную колонку диаметром (30±5) мм и высотой (400±50) мм, путем подачи экстракта сверху со скоростью (10±2) смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия/мин. По окончании сорбции пропускают 700 г/дмГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия раствора этилового спирта со скоростью (10±2) смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия/мин до полного удаления следов жира.

Окончание обезжиривания определяют в пробирке по исчезновению мутного жирового кольца при наслаивании 1-2 смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия исходящего из колонки спиртового раствора на 5-6 смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия воды.

Затем удаляют балластные белки путем пропускания 0,2 моль/дмГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия раствора аммония уксуснокислого с рН (5,25±0,05) со скоростью (10±2) смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия/мин. Расход раствора аммония уксусно-кислого составляет 3 дмГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия на 60 г катионита. Полноту удаления балластных веществ контролируют спектрофотометрически при длине волны 280 нм. Оптическая плотность не должна превышать 0,05.

Десорбцию инсулина осуществляют путем пропускания через колонку 0,2 моль/дмГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия раствора аммония хлористого с рН (9,5±0,2) со скоростью (2±1) смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия/мин. Начало сбора элюата определяют по появлению помутнения при добавлении 0,3 смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия элюата к 0,3 смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия раствора трихлоруксусной кислоты концентрации 100 г/дмГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия. Конец элюирования определяют по слабоположительной реакции с 100 г/дмГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия раствором трихлоруксусной кислоты или спектрофотометрически до оптической плотности не меньше 0,05.

Объем элюата измеряют в кубических сантиметрах, определяют его активность методом круговой бумажной хроматографии.

Примечание - Перед нанесением на хроматограмму элюат свиной поджелудочной железы разбавляют дистиллированной водой, подкисленной 1 моль/дмГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия раствором соляной кислоты до рН (2,5±0,1), в соотношении 1:1. Соответственно в формуле расчета массовой доли инсулина ГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия умножают на 2.


По окружности бумаги для хроматографирования на расстоянии 2 см от центра круга пипеткой наносят по 0,02-0,03 смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия элюата (в четыре точки) и стандартного раствора инсулина (в две точки). Диаметр хроматограммы 20 см. Хроматограммы помещают в мелкие тарелки диаметром около 20 см, куда предварительно наливают систему растворителей (50±5) смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия. Бумажный круг соединяют с системой растворителей при помощи фитиля, сделанного из той же бумаги, и накрывают тарелкой.

Процесс хроматографирования осуществляют при температуре 18-25 °С в течение 3 ч. По окончании процесса хроматографирования хроматограмму высушивают под тягой, затем помещают на 10 мин в кювету с красителем. Окрашенную хроматограмму несколько раз промывают в кювете 20 г/дмГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия раствором уксусной кислоты (промывной раствор должен быть бесцветным).

Полученная хроматограмма имеет два пятна стандартного раствора и четыре пятна испытуемого раствора. Каждое инсулиновое пятно вырезают, измельчают, помещают в отдельную пробирку и элюируют 4 смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия 0,01 моль/дмГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия раствора гидроокиси натрия в течение 20 мин. Элюат колориметрируют при зеленом светофильтре (длина волны 530-540 нм) в кювете с расстоянием между

рабочими гранями 10 мм.

3.6.4 Обработка результатов

3.6.4.1 Массовую долю инсулина (ГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия) в Ед на 1 кг желез вычисляют по формуле

ГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия,

где ГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия - оптическая плотность исследуемого раствора;

ГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия - оптическая плотность стандартного раствора;

ГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия - активность в Ед на 1 смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия стандартного раствора;

ГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия - объем элюата, смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия;

ГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия - коэффициент пересчета содержания инсулина и инсулиноподобных белков, обладающих гипогликемической активностью в экстракте (для поджелудочной железы крупного рогатого скота - 0,5; свиней - 0,2);

2 - коэффициент пересчета на 1 кг поджелудочной железы

3.6.4.2 За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое значение результатов двух параллельных определений, рассчитанное до второго и округленное до первого десятичного знака.

3.6.4.3 Допускаемое расхождение между результатами двух параллельных определений при ГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия0,95 не должно превышать 10% по отношению к среднему арифметическому значению.

3.6.4.4 Допускаемое расхождение между результатами испытаний, проведенных в двух разных лабораториях, при ГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия0,95 не должно превышать 10% по отношению к среднему арифметическому значению.

3.7 Определение массовой доли инсулина иммунореактивным методом

3.7.1 Аппаратура, материалы, реактивы

Весы лабораторные по ГОСТ 24104 общего назначения 3-го класса точности, с наибольшим пределом взвешивания 500 г.

Весы лабораторные по ГОСТ 24104 общего назначения 2-го класса точности, с наибольшим пределом взвешивания 200 г.

Мясорубка бытовая по ГОСТ 4025.

Микроизмельчитель ткани РТ-1 по нормативному документу.

Потенциометр с погрешностью измерения не более ±0,05 рН.

Центрифуга лабораторная типа К-23 или аналогичная.

Центрифуга с горизонтальным ротором и охлаждением.

Термостат лабораторный, обеспечивающий поддержание заданного температурного режима 30-50 °С.

Гамма-счетчик колодезного типа (Гамма-1, Гамма-2, Гамма-800 или аналогичный).

Пипетки полуавтоматические типа КПД по нормативному документу.

Наконечники для пипеток по нормативному документу.

Штатив лабораторный для пробирок.

Термометр стеклянный технический с диапазоном измерения 0-100 °С с допускаемой погрешностью измерения ±1 °С.

Встряхиватель лабораторный.

Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026.

Пробирки П4-5-14/23 ХС по ГОСТ 25336.

Стаканы В-1-250, В-1-600 по ГОСТ 25336.

Колбы мерные 2-50-2, 2-100-2, 2-200-2, 2-1000-2 по ГОСТ 1770.

Цилиндры 1-100, 1-1000 по ГОСТ 1770.

Ингибитор протеаз (соевый, яичный, "Гордокс" или аналогичный).

Сыворотка крови крупного или мелкого рогатого скота.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Кислота соляная по ГОСТ 3118, х.ч., плотностью 1,19 г/смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия, раствор 0,01 моль/дмГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия.

Натрия гидроокись по ГОСТ 4328, х.ч.

Аммоний серно-кислый безводный по ГОСТ 3769, х.ч.

Натрий фосфорно-кислый однозамещенный по ГОСТ 245, ч.д.а., раствор 0,2 моль/дмГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия.

Натрий фосфорно-кислый двузамещенный по ГОСТ 4172, ч.д.а., раствор 0,2 моль/дмГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия.

Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962*.
________________
* На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 51652-2000.

Кислота ортофосфорная по ГОСТ 6552, х.ч., плотностью 1,72 г/смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия.

Набор реактивов "РИА-ИНС-ПГ-125ГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия" производства Института биоорганической химии АН БССР.

3.7.2 Подготовка к испытанию

3.7.2.1 Приготовление насыщенного раствора аммония серно-кислого

516,5 г аммония серно-кислого помещают в колбу вместимостью 1 дмГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия, приливают в нее 500 смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия горячей дистиллированной воды. После полного растворения соли приготовленный раствор охлаждают до комнатной температуры. Срок хранения раствора - 1 мес.

3.7.2.2 Приготовление иммуноглобулинов, свободных от инсулина

К 58 смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия сыворотки крови прибавляют 42 смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия насыщенного раствора аммония серно-кислого и тщательно перемешивают, затем центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 мин. Надосадочную жидкость сливают, осадок растворяют в дистиллированной воде в объеме, равном исходному объему сыворотки крови. Таким образом проводят трехкратное переосаждение иммуноглобулинов при вышеуказанных условиях.

Перед последним осаждением в пробирки вместимостью 5 смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия разливают по 2 смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия раствора иммуноглобулинов, а затем в каждую пробирку добавляют по 1,5 смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия насыщенного раствора аммония серно-кислого. Содержимое пробирок тщательно перемешивают, центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 мин. Надосадочную жидкость сливают, пробирки оставляют в наклонном положении на фильтровальной бумаге для удаления остатков раствора, после чего пробирки закрывают пробками.

Полученные таким образом иммуноглобулины хранят в морозильной камере бытового холодильника в течение 2 мес. Перед употреблением осадок размораживают и растворяют в 2 смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия дистиллированной воды.

3.7.2.3 Приготовление фосфатного буфера с рН (7,5±0,1)

В мерную колбу вместимостью 200 смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия вносят 81,0 смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия раствора натрия фосфорно-кислого двузамещенного концентрации 0,2 моль/дмГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия и 19,0 смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия раствора натрия фосфорно-кислого однозамещенного концентрации 0,2 моль/дмГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия. Содержимое колбы перемешивают и измеряют рН. Убедившись, что рН равен (7,5±0,1), объем раствора в колбе доводят дистиллированной водой до метки. Раствор хранят при температуре 4 °С.

3.7.2.4 Приготовление фосфатного буфера с рН 7,4, содержащего ингибитор протеаз в количестве 300 ингибирующих единиц в 1 смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия

Приготовление раствора зависит от используемого для проведения анализа ингибитора протеаз. При использовании ингибитора протеаз "Гордокс", содержащего 10000 ингибирующих единиц в 1 смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия, 1,5 смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия содержимого ампулы переносят в мерную колбу вместимостью 50 смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия, и доводят объем колбы фосфатным буфером до 50 смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия. Раствор должен быть свежеприготовленным и охлажденным до температуры 4 °С.

3.7.2.5 Приготовление подкисленной воды для разведения проб

В стакан вместимостью 500 смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия наливают 250 смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия дистиллированной воды и при постоянном перемешивании малыми порциями приливают 0,01 моль/дмГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия раствор соляной кислоты до достижения в воде рН 4,0 (потенциометрически). Приготовленную таким образом воду хранят в холодильнике при температуре 4 °С.

3.7.2.6 Приготовление 0,05 моль/дмГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия раствора фосфатного буфера, содержащего 150 ингибирующих единиц в 1 смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия

В мерную колбу вместимостью 50 смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия вносят 25 смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия фосфатного буфера, содержащего 300 ингибирующих единиц в 1 смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия, и объем раствора в колбе доводят подкисленной до рН 4,0 водой до метки. Раствор готовят перед употреблением.

3.7.2.7 Приготовление первого экстрагирующего раствора

167 смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия дистиллированной воды смешивают с 833 смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия этилового спирта, а затем к раствору прибавляют 13,6 смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия концентрированной ортофосфорной кислоты. Раствор готовят перед употреблением и охлаждают до температуры 4 °С.

3.7.2.8 Приготовление второго экстрагирующего раствора

375 смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия дистиллированной воды смешивают с 625 смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия 96-градусного этилового спирта, затем к раствору прибавляют 2,7 смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия концентрированной ортофосфорной кислоты.

3.7.2.9 Приготовление растворов калибровочных проб, антисыворотки, 125ГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия-uнсулина и буферного раствора

Растворы калибровочных проб, антисыворотки и 125ГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия-инсулина готовят из набора реактивов "РИА-ИНС-ПГ-125ГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия" в соответствии с инструкцией по применению, утвержденной в установленном порядке. Буферный раствор и раствор полиэтиленгликоля в данном наборе реактивов поставляют готовыми к употреблению.

3.7.2.10 Подготовка сырья к испытанию

Навеску 100 г измельченной поджелудочной железы гомогенизируют в 4-кратном объеме первого экстрагирующего раствора на микроизмельчителе тканей РТ-1 в течение 5 мин при 8000 об/мин, а затем в течение 10 мин при 6000 об/мин. По окончании гомогенизации на РТ-1 измеряют объем полученного гомогената (ГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия).

10 смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия гомогената помещают в стакан стеклянного гомогенизатора и продолжают дальнейшее измельчение ткани в течение 10 мин, а затем переносят его в центрифужный стакан или пробирку и центрифугируют в течение (25±5) мин в центрифуге с охлаждением при 5000 об/мин. Надосадочную жидкость сливают в мерный цилиндр и измеряют ее объем. К осадку приливают второй экстрагирующий раствор в объеме, равном объему надосадочной жидкости, и стеклянной палочкой хорошо перемешивают осадок с раствором. После перемешивания содержимое стакана или центрифужной пробирки переносят в стакан стеклянного гомогенизатора и проводят гомогенизацию осадка в течение 10 мин, не допуская поднятия температуры при гомогенизации в растворе выше 4 °С. Гомогенат переносят в центрифужный стакан или пробирку и проводят центрифугирование в течение (25±5) мин в центрифуге с охлаждением при 6000 об/мин. Надосадочную жидкость присоединяют к первому экстракту, перемешивают содержимое цилиндра стеклянной палочкой и измеряют общий объем объединенных экстрактов (ГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия).

0,1 смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия объединенного экстракта последовательно разводят охлажденной до 4 °С подкисленной до рН 4,0 водой в 10ГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия, 10ГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия, 10ГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия и 10ГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия раз.

Из полученных разведений 10ГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия и 10ГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия отбирают по 0,25 смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия раствора и смешивают с равным количеством фосфатного буфера, содержащего 300 Ед/смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия ингибитора пр

отеаз.

3.7.3 Проведение испытания

В пробирки при комнатной температуре вносят растворы реагентов в последовательности и количестве, указанных в таблице 2.


Таблица 2

Реагенты в порядке их внесения

Количество реагентов, вносимых в пробирки, смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия

Т

Н

К

П

Буферный раствор

0,4

0,2

0,1

0,1

125ГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия-иисулин

0,1

0,1

0,1

0,1

Калибровочные пробы

-

КГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия0,1

0,1

-

Определяемые пробы

-

-

-

0,1

Антисыворотка

-

-

0,1

0,1

Иммуноглобулины

-

-

-

0,1

0,05 моль/дмГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия фосфатный буфер

-

0,1

0,1

-

Примечание - Т - общая активность 125ГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия-инсулина, добавляемого в одну пробирку;

Н - неспецифическое связывание для калибровки;

К - калибровочные пробы;

П - определяемые пробы.



Содержимое пробирок тщательно перемешивают и инкубируют 3-4 ч при температуре (37±1) °С в термостате. После инкубации в каждую пробирку, кроме пробирок Т, добавляют по 0,8 смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия охлажденного раствора полиэтиленгликоля. Содержимое пробирок интенсивно перемешивают в течение 5 мин на встряхивателе. Все пробирки, кроме пробирок Т, одновременно центрифугируют в центрифуге с горизонтальным ротором и охлаждением в течение 20 мин при 3000 об/мин.

После центрифугирования из всех пробирок, кроме пробирок Т, одновременно сливают надосадочную жидкость. Для удаления остатков жидкости пробирки опрокидывают на фильтровальную бумагу.

Все пробирки с осадками и пробирки Т помещают в гамма-счетчик и измеряют скорость счета в каждой пробирке. Время счета - 1 мин.

3.7.4 Обработка результатов

3.7.4.1 При использовании счетчиков Гамма-800 или фирмы ЛКB и соответствующей программы расчет концентрации инсулина автоматический.

В случае самостоятельного расчета количество инсулина в 1 смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия разбавленного экстракта находят по калибровочной кривой. Для построения калибровочной кривой необходимо провести следующие расчеты.

Находят средние арифметические значения скоростей счета 125ГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия-инсулина для каждой пары пробирок (ГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия).

Рассчитывают значение ГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия100% для каждой калибровочной и определяемой пробы,

где ГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия - средняя скорость счета в пробирках, содержащих калибровочные пробы или определяемые образцы, имп/мин;

ГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия - средняя скорость счета в пробирках, содержащих "нулевую" калибровочную пробу, имп/мин.

Рассчитывают значение ГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия100%,

где ГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия - общая активность 125ГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия-инсулина, добавляемого в одну пробирку, характеризующая связывающую способность антисыворотки или процент связанной метки для нулевого счета в пробирках, содержащих "нулевую" калибровочную пробу.

После проведения расчетов в линейных координатах строят калибровочную кривую, откладывая на оси ординат значение ГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия100%, а на оси абсцисс - значение концентрации калибровочных проб инсулина в мкЕд/смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия, добавленного в одну пробирку. Для определяемых проб экстракта поджелудочной железы на основании соответствующих значений ГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия100% по калибровочному графику определяют концентрацию инсулина в 1 смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия разбавленного раствора.

Массовую долю инсулина в поджелудочной железе (ГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия) в Ед/кг вычисляют по формуле

ГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия,

где ГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия - концентрация инсулина, найденная по калибровочному графику для соответствующего разведения, мкЕд/смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия;

ГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия - степень разведения экстракта;

ГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия - общий объем экстракта после гомогенизации на РТ-1, смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия;

ГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия - общий объем объединенных экстрактов, смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия;

10 - объем гомогената, используемый для проведения дополнительной гомогенизации в стеклянном гомогенизаторе, смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия;

10ГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия - коэффициент перевода единиц мкЕд/смГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия в Ед/кг;

ГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия - масса навески измельченной поджелудочной железы

, кг.

3.7.4.2 За окончательный результат испытаний принимают среднее арифметическое значение результатов двух параллельных определений, рассчитанное до второго и округленное до первого десятичного знака.

3.7.4.3 Допускаемое расхождение между результатами двух параллельных определений при ГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия0,95 не должно превышать 17% по отношению к среднему арифметическому значению.

3.7.4.4 Допускаемое расхождение между результатами испытаний, проведенных в двух разных лабораториях, при ГОСТ 11285-93 Железы поджелудочные крупного рогатого скота и свиней замороженные. Технические условия0,95 не должно превышать 20% по отношению к среднему арифметическому значению.

4 Транспортирование и хранение

4.1 Транспортирование

Замороженные поджелудочные железы транспортируют всеми видами транспорта при температуре не выше минус 20 °С в соответствии с правилами перевозок скоропортящихся грузов, действующими на соответствующем виде транспорта.

Транспортирование замороженных поджелудочных желез в пакетированном виде - по ГОСТ 21650, ГОСТ 24597, ГОСТ 26663.

4.2 Хранение

Замороженные поджелудочные железы хранят в упакованном виде в камере при температуре не выше минус 20 °С.

Срок хранения замороженных поджелудочных желез - 6 мес с момента сбора.

Хранение замороженных поджелудочных желез на складах транспортных организаций не допускается.



Последние документы

Copyright © 2018